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시험관내에서 합성한 오이모자이크 바이러스 RNA단편을 성공적으로 절단한 ribozyme의 식물체내의 발현
박상규, Park. Sang-Gyu 한국응용생명화학회 한국농화학회지 6 Pages
한국응용생명화학회 한국농화학회지 1996, Vol.39 No.5 355-360 (6 pages)
식물체내에 ribozyme 유전자가 존재하는지의 여부는 합성효소증폭반응(PCR)을 이용하였던바, 일곱개체가 예상된 570 염기쌍의 DNA 단편을 가지고 있었다. 이들 중 네 개체로부터 RNA을 분리하여 formamide를 함유한 agarose에서 전기영동한 후 35S-ribozyme-nos의 DNA 단편으로 Northern hybridization을 행하였던 바, 식물세포내의 nuclease에 의해 ribozyme RNA가 분해된 듯 감지 할 수 없었다. 따라서 ribozyme을 이용하여 바이러스 저항성 식물체를 얻으려면 nuclease에 의해 분해되지 않는 ribozyme이 필요할 것으로 사료된다. -
인공적으로 합성한 오이모자이크 바이러스 RNA의 헤머헤드 ribozyme에 의한 시험관내에서의 절단
박상규, 황영수, Park. Sang-Gyu, Hwang. Young-Soo 한국응용생명화학회 한국농화학회지 8 Pages
한국응용생명화학회 한국농화학회지 1994, Vol.37 No.1 56-63 (8 pages)
염기, 120 nt의 벡터에서 비롯된 염기를 포함한다. Ribozyme RNA의 크기는 164 nt인데 38 nt의 ribozyme 염기부분과 그외는 기질의 것과 같은 염기를 포함한다. CMV 기질 RNA는 ribozyme RNA에 의하여 특이적으로 절단되어 96 nt와 80 nt 두개의 조각을 만들었다. 이러한 특이적 절반은$37^{circ}C$ 보다 $55^{circ}C$에서 더 빠르게 일어났다. SspI으로 처리한 경우 만들어진 기질 RNA(2234 nt)도 역시 위치 ribozyme에 의해 두조각으로 절반되었으며 SspI 처리 후 만들어진 ribozyme RNA(2222 nt)에 의해서 특이적으로 절단되었다. -
2가 양이온이 Thiamine Pyrophosphate에 의한 Group I Intron Ribozyme의 Splicing 억제에 미치는 영향
안성준, 박인국 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2002, Vol.38 No.1 13-18 (6 pages)
2가 양이온($Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$)이 조효소 thiamine pyrophosphate에 의한 T4파지 티민생합성 유전자 (td) 인트론 RNA의 splicing에 미치는 영향을 조사하였다. $Mg^{2+}$를 30 mM까지 증가시켰을 때 splicing 활성은 농도에 비례하여 증가하였다. 그러나 $Mg^{2+}$이 존재하지 않는 상태에서 0.1-4 mM 농도에 걸쳐 $Zn^{2+}$를 사용한 결과 약 20% 정도의 splicing이 일어났다. 이때 대부분의 splicing product는 인트론-엑손2 및 엑손2였고 엑손1-엑손2는 검출되지 않았다. 그리고 4 mM 농도에서는 RNA가 대부분... -
Inactivation of the Ribozyme with Fluorescent Dyes
조봉래, Cho. Bong-Rae 대한화학회 대한화학회지 3 Pages
대한화학회 대한화학회지 2009, Vol.53 No.6 811-813 (3 pages)
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Elucidation of Double Exponential Behavior in the T1 Relaxation of the Tetrahymena Group I Ribozyme
Kim. Hee-Eun, Seo. Yeo-Jin, Kang. Young-Min, Lee. Eun-Hae, Lee. Yeon-Mi, Lee. Joon-Hwa 대한화학회 Bulletin of the Korean Chemical Society 4 Pages
대한화학회 Bulletin of the Korean Chemical Society 2009, Vol.30 No.10 2449-2452 (4 pages)
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Development of Virus-Induced Gene Expression and Silencing Vector Derived from Grapevine Algerian Latent Virus
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 6 Pages
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 2016, 32권 4호 11 371-376 (6 pages)
Grapevine Algerian latent virus (GALV) is a member of the genus Tombusvirus in the Tombusviridae and infects not only woody perennial grapevine plant but also herbaceous Nicotiana benthamiana plant. In this study, we developed GALV-based gene expression and virus-induced gene silencing (VIGS) vectors in N. benthamiana. The GALV coat protein deletion vector, pGMG, was applied to express the reporter gene, green fluorescence protein (GFP), but the expression of GFP was not detected due to the... -
Optimization of a Virus-Induced Gene Silencing System with Soybean yellow common mosaic virus for Gene Function Studies in Soybeans
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 11 Pages
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 2016, 32권 2호 5 112-122 (11 pages)
Virus-induced gene silencing (VIGS) is an effective tool for the study of soybean gene function. Successful VIGS depends on the interaction between virus spread and plant growth, which can be influenced by environmental conditions. Recently, we developed a new VIGS system derived from the Soybean yellow common mosaic virus (SYCMV). Here, we investigated several environmental and developmental factors to improve the efficiency of a SYCMV-based VIGS system to optimize the functional analysis of... -
Establishment of a Simple and Rapid Gene Delivery System for Cucurbits by Using Engineered Zucchini Yellow Mosaic Virus
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 7 Pages
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 2016, 32권 1호 10 70-76 (7 pages)
The infectious full-length cDNA clone of zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) isolate PA (pZYMV-PA), which was isolated from pumpkin, was constructed by utilizing viral transcription and processing signals to produce infectious in vivo transcripts. Simple rub-inoculation of plasmid DNAs of pZYMV-PA was successful to cause infection of zucchini plants (Cucurbita pepo L.). We further engineered this infectious cDNA clone of ZYMV as a viral vector for systemic expression of heterologous proteins in... -
Establishment of an Agrobacterium-mediated Inoculation System for Cucumber Green Mottle Mosaic Virus
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 5 Pages
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 2015, 31권 4호 13 433-437 (5 pages)
The infectious full-length cDNA clones of Cucumber green mottle mosaic virus (CGMMV) isolates KW and KOM, which were isolated from watermelon and oriental melon, respectively, were constructed under the control of the cauliflower mosaic virus 35S promoter. We successfully inoculated Nicotiana benthamiana with the cloned CGMMV isolates KW and KOM by Agrobacterium-mediated infiltration. Virulence and symptomatic characteristics of the cloned CGMMV isolates KW and KOM were tested on several... -
Molecular and Biological Characterization of an Isolate of Cucumber mosaic virus from Glycine soja by Generating its Infectious Full-genome cDNA Clones
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 9 Pages
한국식물병리학회 The Plant Pathology Journal 2014, 30권 2호 6 159-167 (9 pages)
Molecular and biological characteristics of an isolate of Cucumber mosaic virus (CMV) from Glycine soja (wild soybean), named as CMV-209, was examined in this study. Comparison of nucleotide sequences and phylogenetic analyses of CMV-209 with the other CMV strains revealed that CMV-209 belonged to CMV subgroup I. However, CMV-209 showed some genetic distance from the CMV strains assigned to subgroup IA or subgroup IB. Infectious full-genome cDNA clones of CMV-209 were generated under the control... -
흑조위축병 바이러스 RNA를 절단하는 망치머리형 라이보자임의 제작
김주곤, 손성한, 이석순, 황영수, 박종석, Kim. Ju-Kon, Sohn. Seong-Han, Lee. Sug-Soon, Hwang. Young-Soo, Park. Jong-Sug 한국응용생명화학회 한국농화학회지 6 Pages
한국응용생명화학회 한국농화학회지 1995, Vol.38 No.6 522-527 (6 pages)
흑조위축병 바이러스(RBSDV)에 대한 antiviral agent를 개발하기위하여 RBSDV 게놈 조각 3번을 절단하는 망치머리형 구조의 라이보자임을 설계하였다. 라이보자임과 기질의 oligonucleotides는 DNA 합성기로 합성 후 서로 합치고, pBluescript KS(+)에 삽입하였다. 라이보자임과 기질 RNA는 $T_3$ RNA polymerase로 기내 전사하여 각각 193과 183 nucleotide의 RNA를 얻었다. 기질 RNA는 라이보자임 RNA에 의해 $55^{circ}C$에서 2개의 조각으로 절단되었으나 $37^{circ}C$에서는 절단되지 않았다. 또한 RBSDV의 3번 조각 RNA도 동일한... -
Anti-HIV RNAs and Viral Vectors for Gene Therapy
박정혜, Park. Jeong-Hee 한국생명과학회 생명과학회지 9 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2008, Vol.18 No.5 738-746 (9 pages)
뿐 아니라 RNA decoy, anti-sense RNA, ribozyme 등의 RNA 기법이 근래에 활발히 연구되어 왔다. 특히, 최근에는 small interfering RNA(siRNA)를 이용하여 HIV 바이러스를 억제하는 연구가 기존의 RNA 기법과 더불어 새로이 연구되고 있다. 이러한 anti-HIV RNA들은 작은 분자물질이고 쉽게 조작이 가능 하며 바이러스 억제에도 아주 효과적인 이점이 있으나, 장기적이고도 안정적으로 발현하기 위해서는 세포내로 전달하는 수단과 해당세포에 독성을 일으키지 않도록 적당량 발현하기 위한 유전자 발현체계 등은 신중히 선택하여야 할... -
In vitro Synthesis of Ribonucleic Acids by T7 RNA Polymerase That was Fast Purified with a Modified Procedure
김기선, 최우형, 공수정, 전숭종, 김재현, 오상택, 김동은, Kim. Ki-Sun, Choi. Woo-Hyung, Gong. Soo-Jung, Jeon. Sung-Jong, Kim. Jae Hyun, Oh. Sangtaek, Kim. Dong-Eun 한국생명과학회 생명과학회지 8 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2005, Vol.15 No.5 755-762 (8 pages)
세포 내에서 매우 적은 양으로 존재하는 RNA 전사체와 기능적으로 동일하거나 비슷한 RNA를 RNA 중합효소를 써서 in vitro에서 생화학적으로 의미 있는 양 만큼을 합성할 수 있다. T7 RNA중합효소를 발현하는 재조합 유전자를 지닌 대장균주 BL21/pAR1219로부터 순수한 T7 RNA중합효소를 손쉽게 얻는 방법을 본 논문에서 소개한다. 황산암모늄 분획화와 sephadex SP 컬럼 크로마토그래피법으로써 여타의 방법과 비교하여 더 간단하고 빠르게, 그리고 경제적으로 T7 RNA 중합효소를 분리할 수 있었다. 정제된 T7 RNA중합효소를 이용하여... -
C형 간염바이러스(HCV)의 NS5B RNA Replicase에 의해 활성이 유도되는 Hammerhead 리보자임에 의한 HCV 복제 억제 연구
이창호, 이성욱, Lee. Chang-Ho, Lee. Seong-Wook 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2011, Vol.47 No.3 188-193 (6 pages)
C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV) 증식을 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물로서, HCV 증식조절인자인 NS5B RNA replicase 존재에 의해 allosteric하게 활성이 유도될 수 있는 HCV internal ribosome entry site (IRES) 표적 hammerhead 리보자임을 개발하였다. 이러한 리보자임은 HCV IRES 염기서열 중 +382 nucleotide 자리를 인지하는 hammerhead 리보자임, NS5B RNA replicase와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, 그리고 aptamer와 NS5B와의 결합에 의해 리보자임 활성을 유도할 수 있도록 구조적 변이를... -
C형 간염바이러스(HCV) 유전체를 특이적으로 변형할 수 있는 Trans-Splicing Aptazyme 발굴
김주현, 이창호, 장선영, 이성욱, Kim. Ju-Hyun, Lee. Chang-Ho, Jang. Sun-Young, Lee. Seong-Wook 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2008, Vol.44 No.3 186-192 (7 pages)
C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV) 복제를 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물을 개발하기 위하여 특정 리간드 존재에 의해 allosteric하게 그 활성이 조절될 수 있는 HCV 유전체 표적 trans-splicing 리보자임(trans-splicing aptazyme)을 발굴하였다. 이러한 trans-splicing aptazyme은 특정 리간드와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, aptamer와 리간드와의 결합에 의해 리보자임 활성을 유도할 수 있도록 구조적 변이를 전달할 수 있는 communication module부위 및 HCV IRES의 +199 nt를... -
C형 간염바이러스(HCV)의 NS5B RNA Replicase에 의해 그 활성이 조절되는 HCV지놈 표적 Hammerhead 리보자임 개발
이창호, 이성욱, Lee. Chang-Ho, Lee. Seong-Wook 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2007, Vol.43 No.3 159-165 (7 pages)
C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV)증식을 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물을 개발하기 위하여 HCV 중식조절이자인 NS5B RNA replicase 존재에 의해 allosteric하게 그 활성 이 조절될 수 있는 HCV internal ribosome entry site (IRES) 표적 hammerhead 리보자임을 개발하였다. 우선 HCV IRES 염기서열 중+382 nucleotide(nt) 부위가 리보자임에 의해 가장 잘 인식되었음을 관찰하였다. 이러한 allosteric 리보자임은 NS5B RNA replicase와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, aptamer와 NS5B와의 결합에 의해... -
Tetrahymena thermophila의 group I intron에 의한 trans-splicing 반응에 미치는 표적 RNA 구조의 영향분석
한국미생물학회 미생물학회지 1999, Vol.35 No.3 211-217 (7 pages)
미치는 영향을 분석하기 위해 강력한 stem-loop 형태의 안정된 구조를 갖고 있는 표적 RNA mapping 분석 방법을 이용한 결과 in vitro 뿐만 아니라 in vivo 에서도 stem 부위의 염기들에 반해 loop 부위의 염기들이 ribozyme 에 의해 잘 인지되었으며 이러한 결과는 그러한 부위들을 인지할 수 있는 ribozyme 들에 의한 trans-cleavage 그리고 trans-splicing 반응을 수행함으로써 검증하였다. 또한 이러한 trans-splicing 반응은 정확하게 일어남을 반응 산물의 염기서열 결정을 통해 확인하였다. 따라서 표적 RNA 의 구조가 in vitro 및... -
Re-Engineering of Carcinoembryonic Antigen RNA with the Group I Intron of Tetrahymena thermophila by Targeted Trans-Splicing
JUNG. HEUNG-SU, LEE. SEONG-WOOK 한국미생물생명공학회 Journal of microbiology and biotechnology 6 Pages
한국미생물생명공학회 Journal of microbiology and biotechnology 2005, Vol.15 No.6 1408-1413 (6 pages)
