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유전자 표적화를 위한 단백질공학 연구동향: Homing Endonucleases and Zinc Finger Nucleases
정대은, 김근중, Cheong. Dea-Eun, Kim. Geun-Joong 한국생물공학회 KSBB Journal 8 Pages
한국생물공학회 KSBB Journal 2010, Vol.25 No.3 215-222 (8 pages)
Monogenic disease의 치료를 위한 하나의 전략으로 viral vector를 이용한 gene therapy에 비해 독성이 적은 gene targeting 기술을 이용하기 위한 연구가 진행되고 있다. 이러한 연구의 주된 관점은 자연적인 HR의 낮은 효율을 개선하기 위한 DSB 유도 방법으로, 선택성을 높일 수 있는 긴 염기서열의 인식이 가능한 artificial endonuclease의 개발이다. 본 글에서는 이러한 artificial endonuclease 중, 가장 많이 연구 되고 있는 homing endonuclease와 zinc finger nuclease를 간략히 소개하였다. 전자와 후자 모두, 인식 서열에... -
Streptomyces avermitilis에서 olmA5 Gene의 Knock-out에 의한 Oligomycin 합성 억제
강현우, 유연우, Kang. Hyun-Woo, Ryu. Yeon-Woo 한국생물공학회 KSBB Journal 8 Pages
한국생물공학회 KSBB Journal 2009, Vol.24 No.3 279-286 (8 pages)
avermitilis의 chromosomal DNA와의 homologous recombination에 의하여 olmA5 gene의 disruption을 유도하였다. Disruption mutants (olmA5::apra)는 PCR을 통해 olmA5 gene의 위치에 apramycin resistance gene이 존재하는 것으로 확인하였고, 또한 HPLC 분석을 통해 oligomycin 생합성이 완전히 제거된 것임을 확인하였다. 그러나 disruption mutant (olmA5::apra)를 이용하여 avermectin 만을 생산할 수 있었으나, avermectin의 생산량에는 거의 변화가 없었다. 이러한 mutants는 산업적으로 avermectin을 생산하기 위한 균주 개량의... -
Mycobacteria에 적용 가능한 genetic tool로서의 새로운 vector system 개발
정지아, 이하나, 고인정, 오정일, Jeong. Ji-A, Lee. Ha-Na, Ko. In-Jeong, Oh. Jeong-Il 한국생명과학회 생명과학회지 9 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2013, Vol.23 No.2 290-298 (9 pages)
replication origin (TSRO)과 counterselectable marker로 levansucrase를 암호화하는 sacB 유전자를 포함하는 suicide vector pKOTs, chromosomal DNA로 site-specific recombination을 통해 삽입되는 lacZ transcriptional fusion vector pMV306lacZ, 그리고 TSRO를 가지는 minitransposon vector pTnMod-OKmTs를 개발하였다. 이 vector들은 실질적으로 M. smegmatis에서 효과적으로 작동하는 것이 확인되었으며 목적으로 하는 실험 결과 도출 가능성 또한 보여주었다. 따라서 이들 vector는 앞으로의 mycobacteria에 대한 효과적인... -
Vibrio parahaemolyticus collagenase 불활성화 돌연변이체의 제조 및 특성
이재원, 전인준, 강호영, 차재호 한국생명과학회 생명과학회지 6 Pages
한국생명과학회 생명과학회지 2004, Vol.14 No.2 362-367 (6 pages)
통하여 원 균주인 V. varahaemolyticus 04에 전달하였다. 전달된 pVCM03 유래의 재조합 vvpC::npfII DNA는 homologous recombination에 의해 wild-type allele와 교환되어 돌연변이체를 형성하게 되고, 돌연변이체는 10% sucrose가 함유된 TCBS 배지에서 선별되었다. Allele exchange는 PCR에 의한 증폭된 DNA의 크기 비교로 확인하였다. 돌연변이체인 V. parahaemolyticus CM은 원 균주와 비교하였을 때 약 4배정도 낮은 콜라겐 분해 활성을 나타내었고, vero cell을 이용한 MTT assay에서도 원 균주에 비하여 낮은 세포독성을 보였다. -
효모 감수분열과정에서의 유전자 재조합 기전 특이적 DNA 중간체의 구조 변화
성영진, 윤상욱, 김근필, Sung. Young Jin, Yoon. Sang Wook, Kim. Keun Pil 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2013, Vol.49 No.1 1-7 (7 pages)
유전자 재조합체는 상동염색체간의 예정된 DNA 가닥 전이와 교환이 이루어지는 상동염색체 재조합 과정에 의하여 생성된다. 이 재조합 경로는 DNA 이중 가닥 절단(double-strand breaks, DSBs)에 의해서 개시되며, 전이 과정의 중간단계에서 DNA의 구조적 변이 중간체인 단일 가닥 침투(single-end invasions, SEIs)와 이중 홀리데이 접합(double-Holliday junctions, dHJs)이 형성되어 교차성(crossover, CO) 혹은 비교차성(non-crossover, NCO) 결과물이 만들어진다. 본 연구는 이중 가닥 절단, 단일 가닥 침투, 이중 홀리데이 접합과... -
효모의 재조합 변이주를 이용한 인간 Centromeric Alphoid DNA Repeat의 안정성에 관한 연구
김광섭, 신영선, 이상엽, 안은경, 도은주, 박인호, 임선희, 선우양일, Kim. Kwang-Sup, Shin. Young-Sun, Lee. Sang-Yeop, Ahn. Eun-Kyung, Do. Eun-Ju, Park. In-Ho, Leem. Sun-H 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2007, Vol.43 No.4 243-249 (7 pages)
이 영역은 출아효모에서 alphoid DNA 반복서열을 hook으로 이용하여 Transformation-associated recombination (TAR) cloning법을 사용하여 선택적으로 분리할 수 있다. 이러한 실험방법으로 먼저 repeat array를 rolling-circle amplication (RCA)를 통하여 약 5 kb까지 길이를 연장시킨 후, 효모내에서 상동성재 조합을 이용한 TAR cloning법을 사용하여 분리할 수 있다. 이렇게 분리된 35 kb-50 kb 길이의 4종류의 centromeric DNA repeat arrays (2,4,5,6 mer)를 사용하여, 반복서열의 안정성 유지를 조사하기 위해 상동성재조 합... -
Rhodospirillum rubrum Plasmid pKY1의 유전정보 분석과 그의 활용에 관한 연구
김복환, 김정목 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 2004, Vol.40 No.2 172-177 (6 pages)
중 하나이다. 근래 이러한 광조건에 의한 균주내 변화 과정이 균주가 지니는 extrachromosomal plasmid와 관련이 있음이 보고되었다. 본 연구는 광합성 박테리아 R. rubrum의 extrachromosomal plamid pKYl 을 분리 정제하고 이를 제한효소 HindIII로 단편화 하여 이들 단편의 일부에 대한 염기서열을 분석하고 이들의 기능을 추론하였다. 본 연구를 통하여 plasmid pKY1에 박테리아의 유전적 재조합 (genetic recombination)에 관여하는 단백질에 대한 정보가 위치하고 있음을 유전자 및 아미노산 상동성 조사를 통하여 알 수 있었다. -
Saccharomyces cerevisiae의 감수분열 특이적 Protein Kinase인 Ime2의 역할
임선희, 탁연수, 선우양일, Leem. Sun-Hee, Tak. Yon-Soo, Sunwoo. Yang-Il 한국미생물학회 미생물학회지 8 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 1999, Vol.35 No.4 258-265 (8 pages)
출아효모에서는 질소원의 고갈과 MATa/MAT${alpha}$ 이배체 세포의 감수분열기 특이적인 유전자 발현에 의해 체세포분열기의 G1기에서 감수분열기로의 진행이 결정된다. 이러한 두 경로는 감수분열기 특이적인 IME 유전자군에 의한 전사조절에 의해 활성화되어 감수분열기가 시작된다. 본 연구는 IME2 유전자가 protein kinase 로서 감수분열기의 어떤 과정에 직접 관여하는가를 조사하기 위하여 먼저 PCR mutagenesis를 통하여 온도감수성 ime2 변이주를 분리하였다. 전체 62개의 온도감수성 변이주 중에서 온도에 따른 포자형성능과... -
Yeast Artificial Chromosome의 효율적인 조작과 분석을 위한 새로운 Bicistronic Fragmentation Vector의 개발에 관한 연구
임향숙, 최주연, 김인경, 강성만, 성영모 한국미생물학회 미생물학회지 7 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 1999, Vol.35 No.1 28-34 (7 pages)
본 연구에서는 Yeast Artificial Chromosome을 효율적으로 조작하고 유유전자의 기능을 보다 더 용이하게 분석하기 위해 EMCV 바이러스의 IRES 염기서열과 $eta$-galactosidase를 포함하는 새로운 bicistronic fragmentation vector를 제조하였다. 이 벡터의 폴리클로닝 site에 네 개의희귀한 제한효소 부위를 도입하여 DNA를 용이하게 클로닝할 수 있게 만들었다. 그러므로 원하는 어떤 YAC도 효모세포에서 쉽게 상동 재조함에 의해 절편할 수 있는 장점이 있다. 이 bicistronic fragmentation vector 시스템을 이용하면하나의... -
Glucoamylase 유전자 STA의 염색체내 삽입에 의한 Saccharomyces diastaticus의 glucoamylase 생성능 향상
안종석, 맹준호, 강대욱, 황인규, 민태익 한국미생물학회 미생물학회지 6 Pages
한국미생물학회 미생물학회지 1993, Vol.31 No.1 48-53 (6 pages)
(a, ura 3, STA1) 을 숙주균주로 하여 염색체의 STA1 유전자 부위에 homologous recombination 되어 삽입하도록 형질전환을 실시하였다. 이렇게 하여 glucoamylase 생성능이 모균주에 비해 최대 6배까지 증대된 다양한 형질전환체들을 얻을 수 있었다. 그리고 glycoamylase 생성능이 증대된 형질전환체들의 염색체 DNA 를 분리하여 Southern hybridization 을 실시한 결과 YIp-STA 가 multi-copy integration 되었음을 확인하였고, 또한 도입해 준 YIp-STA 는 세포분열인 30세대기간 동안 계속되었어도 안정하게 유지되었음을 알았다.