효모 RNA를 10 M 히드록실아민, pH 10, $37^{circ}C$와 5 M 히드록실아민, pH 10, $37^{circ}C$에서 반응시켜 우리딘을 변형시켰다. 우리딘의 변형 정도는 히드록실아민의 농도에 비례한다. 즉 10 M 히드록실아민의 경우 시간 당 4~5%, 5 M 히드록실아민의 경우 시간 당 약 2% 정도였다. 우리딘의 변형 반응 속도는 시간이 경과함에 따라 감소하는데 그 원인은 RNA의 이차구조가 히드록실아민의 반응을 크게 억제하기 때문이라고 본다. 히드록실아민의 이러한 조건에서의 반응은 우리딘에 매우 선택적이고 시티딘의 변형은 무시할 수 있었다. 위의 실험 결과에서 히드록실아민으로 RNA의 우리딘을 변형시킴으로서, RNA의 우리딘 염기 배열 순서를 결정하는데 이용하기 위한 반응 조건은 10 M 히드록살아민, pH 10, $37^{circ}C$로 20분 보다 짧아야 함을 알았다.
Chemical modification of uridine residues in yeast RNA was carried out at two different concentrations of hydroxylamine, 10 M and 5 M, pH 10 and $37^{circ}C$, varying the reaction time. The degree of modification depended on the concentration of hydroxylamine : the range was ca. 4~5% per hour at 10 M hydroxylamine, and 2% per hour at 5 M hydroxylamine. Modification rates decreased with the reaction time, probably due to the limiting effect exerted by the secondary structure of RNA. The modification reaction was highly specific to uridine residues under the above reaction condition, so that the modification reaction on cytidine residues was almost negligible. It is found that less than 1% of uridine residues was modified at pH 10 and 10 M of hydrnxylamine within 20 min. This reaction condition can be utilized for RNA sequencing in chemical methods.
