Penicillin acylase를 Bacillus magaterium ATCC 14945 배양액으로 부터 비교적 간단한 2가지 단계, 즉 celite 흡착(吸着)그로마토그라피와 Sepharose-aminohexyl-penicillin V 친화성(親和性) 그로마토그라피법으로서 정제한 결과 최종수율 63%의 효소활성도, 최종 비활성도(比活性度) 1521 U/mg 단백질, 정제도 446배의 결과를 얻었다. 이렇게 정제된 효소는 7% polyacrylamide gel 전기영동상에서 3개의 단백질대를 보였다. 여러 종류의 기질류사물(基質類似物), 생성물류사물(生成物類似物)을 리간드로 하여 친화성(親和性) 크로마토그라피를 행한 결과 Sepharose-${epsilon}$ACA-Ligand는 본 효소에 전혀 친화력(親和力)을 보여주지 못하였으나 Sepharose-aminohexyl-Ligand는 서로 다른 친화력(親和力)을 보였으며 이중 penicillin V가 가장 우수하였고, ampicillin이 다음으로 우수하였다. 정제된 효소를 사용하여 효소의 일반적 성질, 즉 pH 및 온도의 영향, pH 및 온도에 대한 안정성, 기질 및 여러 저해제 농도에 대한 영향을 관찰하였다.
Penicillin acylase from the culture broth of Bacillus megaterium was purified by the simple 2 steps with a combination of celite adsorption- and Sepharose-aminohexylpenicllin V affinity chromatography. As results, the final preparation of the enzyme showed overall 446-fold purification with yield of 63% and specific activity of 1521 U/mg protein on benzylpenicillin. The preparation, however, showed 3 Protein bands on 7% polyacrylamide gel electrophoresis. Various substrate and product analogues as ligand for affinity chromatography were examined. Sepharose-${epsilon}$-aminocaproyl ligand revealed no affinity to the enzyme at all, while Sepharose-aminohexyl-ligand showed different affinities depending on kinds of ligand, Among them penicillin V showed the best result. By using the final preparation of penicillin acylase, general characteristics of the enzyme, pH and temperature dependences, pH and temperature stabilites, Km on benzylpenicillin, Ki on phenylacetic acid, 6-aminopenicillanic acid and penicillin V, were examined.
