동물 조직내 존재하는 free rihoflavin, FMN 및 FAD를 pmole수준에서 동시에 측정할 수 있는 간단하고 신속한 방법을 연구 조사하였다. treverse-phase HPLC에다 flavins의 fluorescence성질을 이용하여 측정하였다. Flavins은 polarity가 높은 순서로 column으로부터 먼저 나오고 retention time은 FAD가 3.6 min, FMN이 5.4 min 그리고 ribofavin이 9.4 min였다. Retention time은 mobile phase 완충 용액의 methanol부분을 증가시키므로서 단축시킬 수 있었다. Flavins을 동물 간조직에 첨가시 recovery정도는 FAD가 92%, FMN 이 84% 그러고 riboflavin이 98%였다. Flavins 농도에 다른 fluorescence의 relative response를 보면 FAD는 90 pmole, FMN은 85 pmole 그리고 riboflavin은 65 pmole수준까지 직선의 반응관계를 나타내었다. 본 논문에 기술한 방법을 동물의 뇌, 신장, 간 및 심 장조직내 free flavins측정에 적용하였던 바 재래식 fluorometric method와 상응하는 결과를 얻었다.
A rapid and simple procedure for the concurrent assay of riboflavin and its coenzyme forms at the picomole level is described. The method makes use of reverse-phase HPLC with fluorometric detection. Some characteristics of the assay of FAD, FMN and riboflavin, respectively, are as follows. Range of linear response, in picomoles: up to 93, 84, 66; mean retention time, in minutes: 3.6, 5.4, 9.4; recovery from standard solutions, in percent(means $pm$ S.E.): $92{pm}4.7$, $84{pm}3.9$, $98{pm}0.1$. The method has been applied to the determination of flavins in tissue samples such as brain, heart, kidney and liver. The results obtained are comparable to those reported for a conventional fluorometric method.
