간염 B형 바이러스의 pre-S2 부위를 포함하는 DNA 서열을 pORF1 플라스미드의 ompF와 lacZ 유전자 사이에 끼워 넣어 pHBSC20 재조합 플라스미드를 제조하였다. 플라스미드 pHBSC20를 갖는 E. coli TK1046 균주내에서 OmpF와 $eta$-galactosidase사이에 pre-S2 부위를 갖는 "tribrid" 단백질이 생성되었다. 이 융합단백질은 SDS-polyacrylamide gel 전기영동에 의해 확인되었고 pre-S2 부위의 항원성은 immunoblot 분석방법에 의해 확인되었다. 융합단백질의 양은 Coomassie blue로 염색한 gel을 densitometer로 측정한 결과 전체 박테리아 단백질중 1-5%를 차지하는 것으로 나타났다. 따라서 pHBSC20 플라스미드를 갖는 박테리아는 pre-S2-$eta$-galactosidase 융합 단백질을 다량 만들어 낼 수 있으며 이 중에서 pre-S2 부위는 HBV 백신을 생산하는데 유용할 것으로 보인다.
A DNA sequence involving pre-S2 region of Hepatitis B virus (HBV) was inserted between ompF and lacZ gene of the plasmid pORF1 to give a recombinant plasmid pHBSC20. In the plasmid pHBSC20 harboring E. coli TK1046 cells, a "tribrid" protein with the translation product of the insert sandwiched between OmpF and $eta$-galactosidase was produced. The fusion protein was detected by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and the antigenicity of the pre-S2 region was determined by immunoblot analysis. The amount of the fusion protein was estimated as much as 1-5% of the total bacterial protein by densitometric scanning of the Coomassie blue-stained gel. Thus, bacteria transformed with pHBSC20 can provide abundant source of pre-S2-$eta$-galactosidase fusion protein in which the pre-S2 region may be useful for the production of HBV vaccine.
