앞서 보고한 바와 같이 토양으로부터 분리한 K. pneumoniae NFB-320의 pullulanase 유전자를 pBR 322을 이용하여 E. coli에 cloning한 결과 약 14.4kb 의 재조합 plasmid DNA pYKL451을 얻었다. 이러한 pullulanase 유전자에 대한 유전적 정보를 얻기 위해 여러 가지 제한효소로 단일 혹은 이중 절단을 행하여 삽입된 pullulanase 유전자의 제한효소 절단지 도를 작성하였으며, E. coli(pYKL451)과 K. pneumoniae NFB-320이 생산하는 pullulanase의 효소적 특성을 조사하였다. 생산되는 두 균주의 효소는 50-55$^{circ}C$ 부근에서 최적온도를 나타냈으며 최적pH는 모두 6.0이었다. 효소 안정성에 미치는 pH의 영향은 4$0^{circ}C$에서 90min 간 방치했을 때 pH 5.0-10.0에서 안정하였으며 열안정성은 (pH6.0) 각 온도에서 한시간 처리하였을 때 4$0^{circ}C$까지는 안정하였으나 5$0^{circ}C$ 이상에서는 효소의 활성이 급격히 감소하였다.
Pullulanase gene (pul) of Klebsiella pneumoniae NFB-320 which was cloned previously in Escherichia coli with plasmid pBR322. The gene was analyzed with various restriction enzymes. The cloned gene was contained within n 10 kb BamHI DNA fragment. We constructed the restriction map of the hybrid plasmid pYKL451. The optimum temperatures for pullulanases produced in E. coli (pYKL451) and K. pneumoniae NFB-320 were almost the same, 50-55 $^{circ}C$. The optimum pHs for the reaction of the enzymes produced by E. coli (pYKL451) and K. pneumoniae NFB-320 was 6.0. Both enzyme preparations were stable under the range of pH 5.0 to 10.0 when those were kept at 40 $^{circ}C$ for 90 min and were stable until 40 $^{circ}C$ when allowed to stand for 1hr at various temperatures.
