알코올 생산성이 높은 Zymomonas 균주의 기질 이용성을 넓히기 위한 목적으로 natural replicon을 포함하며 적당한 항생제 저항표지를 갖는 plasmid vector의 제조를 시도하였다. Z. mobilis ATCC10988에서 분리된 몇 개의 plasmid중 3.9kb의 적당한 크기를 갖는 pZM3를 선정하여 수종의 제한효소로 처리하여 절편의 크기에 따라 유전자 지도를 작성하였다. pZM 3의 replicon과 pBR 325의 chloramphenicol 저항유전자를 포함한 재조합 plasmid인 pHZ22를 개발하고 이 plasmid vector가 숙주세포인 Z. mobilis ATCC31821에서 독립적으로 replication됨을 확인하였다. 또 하나의 항생제 저항표지로서 RP4의 tetracycline 저항유전자를 분리하여 pHZ22에 도입함으로써 pHZT224를 제조하였는데 이 plasmid vector도 Zymomonas로 conjugation에 의해 전이되어 안정하게 유지 되었다. 본 연구를 통하여 개발된 plasmid vector는 Z. mobilis와 E. coli에 공히 작용하는 shuttle vector 로서 외부 유전자를 Zymomonas에 도입시킬 수 있는 유용한 유전자 운반체임이 확인되었다.
In order to develop useful plasmid vectors for Zymomonas cells, attempts were made to isolate natural plasmids from Z. mobilis ATCC10988. Among a few plasmids isolated, a small plasmid of 3.9 Kb size was chosen and designated as pZM3. By introducing the replication origin of pZM3 into pBR325, a hybrid plasmid vector of 8.4 Kb size, pHZ22, was constructed. This vector contained chloramphenicol resistant gene as a selectable marker and proved to be conjugally transmissible and stably maintained in Z. mobilis. Tetracycline resistant gene was isolated from RP4 and introduced into pHZ22 to make a new vector called pHZT224 of 10.7 Kb size. Through n series of experiments, it was evident that these plasmid vectors containing selectable markers of chloramphenicol and tetracycline resistance were shuttle vectors functional in Z. mobilis as well as E. coli.
