담배 조직 배양 (Nicotiana tobacum L. var., Virginia 115)으로부터 두개의 isoperoxidase $A_3$와 $A_4$를 정제하고 이 효소의 몇가지 성질을 조사하였다. 정제된 isoperoxidase $A_3$의 분자량은 SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis에서 38,000이었고 Sepadex G-150 gel filtration에 의해서 38,500으로 나타났으며, isoperoxidase $A_4$의 분자량은 SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis와 gel filtration에 의해서 모두 43,000이었으므로 이 두 효소는 모두 monomer로 존재한다고 예상된다. Isoperoxidase $A_3$와$A_4$의 guaiacol에 대한 최적 pH는 각각 6.0과 7.0이었고 $K_m$ 값은 이 두 효소 모두 5mM로 동일하였다. Scopoletin, esculetin, ferulic acid와 chlorogenic acid 등의 천연 페놀화합물을 이용한 기질 연구에서 isoperoxidase $A_3$는 각각 0.18 mM, 0.24 mM, 0.26 mM와 0.35 mM의 $K_m$ 값을 나타내었는데 이 값은 isoperoxidase $A_4$의 경우와 크게 다르지 않았다. 또한 이 결과는 다른 담배 조직 배양종인 W-38에서 분리한 $A_3$와 WR-132에서 분리한 $A_f$의 $K_m$ 값과 크게 다르지 않았다. 그러나 이미 scopoletin peroxidase로 그 성질이 특별히 알려져 있는 W-38 isoperoxidase $A_3$와는 달리 Virginia 조직 배양에서 분리한 isoperoxidase $A_3$와 $A_4$는 기질 선호도에 있어서 scopoletin을 특별히 선호하지는 않았다.
Two anodic isoperoxidases, named isoperoxidase $A_3$ and $A_4$, were isolated from tobacco callus line, Nicotiana tabaccum L., var. Virginia 115. Isolation of the enzymes was accomplished using DEAE-cellulose ion exchange chromatography and Sephadex G-150 gel filtration. The molecular weight of isoperoxidase $A_3$ was approximately 38,000 as determined by SDS polyacrylamide gel electrophoresis and 38,500 estimated with Sephadex G-150 gel filtration. The molecular weight of isoperoxidase $A_4$ was 43,000 as determined by SDS polyacrylamide gel electrophoresis and Sephadex G-150 gel filtration. The optimum pHs for guaiacol with isoperoxidase $A_3$ and $A_4$ were pH 6.0 and pH 7.0, respectively, and these two isoperoxidases had same $K_m$ value of 5 mM for guaiacol. Substrate studies with natural phenolic compounds such as scopoletin, esculetin, ferulic acid and chlorogenic acid were performed and the $K_m$ values for these substrates were 0.18 mM, 0.24 mM, 0.26 mM and 0.35 mM, respectively, in case of isoperoxidase $A_3$. Such $K_m$ values did not differ greatly from those of isoperoxidase $A_4$ from Virginia strain and known scopoletin peroxidase $A_f$ from WR-132 strain. In comparison with isoperoxidase $A_3$ from W-38 strain and $A_f$ from WR-132 strain which were known as scopoleticn peroxidases, these two enzymes from Virginia strain showed notable differences in scopoletin oxidizing ability in terms of relative substrate oxidation ratios.
