쥐 간으로부터 분리한 glycolate oxidase는 arginine과 선택적으로 반응하는 시약, phenylglyoxal이나 2, 3-butadione과의 반응에 의하여 효소 활성을 상실하였다. Phenylglyoxal에 의한 효소의 비활성화 반응은 유사 일차반응, phenylglyoxal에 대해서는 일차반응 이였으며, 장시간 반응에 의해서 효소는 완전히 비활성화 되었다. 기질 glycolate나 경쟁적 저해제 phenyllactic acid와 oxalate는 효소의 비활성화에 대해 방어효과를 보여주었다. 다른 종류의 dicarbonyl 화합물 butanedione도 효소와 반응하여 효소를 비활성화 시키나, 반응속도는 phenylglyoxal 반용에 비해 매우 느린 편이다. Butanedione에 의한 효소의 비활성화 반응의 속도도 반응시약의 농도에 비례하였으며, borate 용액은 반응속도를 증가시키는 효과를 나타내었다. Phenylglyoxal이나 butanedione과의 반응에 의해 활성이 감소된 효소용액으로부터 구한 glycolate의 Km 값은 대조 실험으로부터 얻은 Km값과 유사하였다. 아미노산 분석에 의하여 변형된 arginine의 정확한 숫자는 알 수 없었으나, phenylglyoxal에 의하여 80% 정도 활성을 상실한 효소는 소단위 내의 15개의 arginine중에서 1-3개를 상설했으며, 경쟁적 저해제는 arginine 변형에 대해서도 방어효과를 나타내었다. 이러한 실험결과로부터, 효소의 활성부위의 arginine이 기질의 결합에 중요한 역할을 하는 것으로 추측된다.
Glycolate oxidase from rat liver is inactivated by arginine-specific reagents, phenylglyoxal and 2,3-butanedione. Inactivation of the oxidase by phenylglyoxal follows pseudo-first order kinetics, and is first order with respect to the reagent concentration. The oxidase is completely inactivated by prolonged incubation with phenylglyoxal. The substrate glycolate and substrate-competitive inhibitors, phenyllactic acid and oxalate protect the oxidase against inactivation. Other dicarbonyl compound butanedione also reacts with the enzyme to cause loss of activity but at much slower rate. Inactivation by butanedione is also dependent on the reagent concentration, and enhanced by the presence of borate buffer. Kinetic studies with the enzyme partially inactivated by phenylglyoxal or butanedione demonstrate that Km value of glycolate is similar to the constant for the control enzyme. Although amino acid analysis data do not provide the precise number of arginine modified, a few arginyl residues out of the 15 total residues in the subunit seem to be modified upon 80% inactivation by phenylglyoxal, and competitive inhibitor provides some protection against modification of arginyl residues. The present data suggest that arginyl residue(s) is probably involved in the binding of substrate to the enzyme.
