Progesterone-$11{alpha}$-hemisuccinate-BSA를 제조하여 Balb/c 생쥐에 주사하여 얻은 비장세포를 myeloma 세포와 융합하여 여러 가지 subtype 형태($IgG_1$, $IgG_{2a}$, $IgG_{2b}$, IgM)를 가진 항체를 분비하는 7개의 하이브리도마 세포주를 얻었다. 이들이 분비하는 항체들을 간단히 ammonium sulfate 침전법, Protein A-Sepharose 4B 등으로 분리정제하여 그 특성을 조사하였다. 그 결과 단일클론 항체가 18-44% 정도의 수률로 SDS-PAGE상에서 순수분리 되었음을 확인하였다. 이들 항체들의 affinity constant는 $5{ imes}10^7-4{ imes}10^8M^{-1}$ 정도였으며, 이들 항체들은 Progesterone-3-(O-carboxymethyloxime)-BSA를 면역원으로 하여 얻은 항체와 비교했을 때, 특이성과 다른 steroid 호르몬과 교차반응성 등이 클론에 따라 특이하게 나타났다. 특히 이들 항체 중 051-01 clone은 다른 clone에 비해 매우 빠른 성장을 보였으며, 항체의 양이 복수액의 전체 단백질의 38% 정도나 되어 titer level이 매우 높았으며, 방사면역측정법이나 효소면역측정법으로 반응성을 측정했을 때 그 감도가 매우 좋았다.
Seven hybridoma cell lines, 051-01 ($IgG_1$), 051-02 ($IgG_{2b}$), 051-03 ($IgG_1$), 051-04 (IgM), 051-05 ($IgG_{2a}$), 051-06 (IgM), and 051-07 ($IgG_{2a}$) prodcing monoclonal antibodies against progesterone were established. Progesterone $11{alpha}$-hemisuccinate-bovine serum albumin conjugate was prepared using carbodiimide and then used as an immunogen. Spleen cells of Balb/c mice immunized with the immunogen were fused with mouse myeloma (P3-X63-Ag8.653) cells. Hybridoma cells were screened by radioimmunoassay using $^3H$-progesterone. The clones 051-01, 051-03, and 051-05 were purified using protein A-Sepharose 4B affinity chromatography utilizing their subtype characteristics. The purity of the isolated IgG was identified by SDS-PAGE. The progesterone binding capacity of the 5 monoclonal antibodies ranged from 7 to 72 pmole/mg IgG and the affinity constant ranged from $5.0{ imes}10^7;M^{-1}$ to $4{ imes}10^8;M^{-1}$ by the Scatchard analysis method. Cross-reactivities of the monoclonal antibodies, 051-01 and 051-02 with other steroid hormones were compared. These antibody reactions were very specific to progesterone and sensitive in a competitive immunoassay.
