말쥐치 육조직 중에 분포하는 collagenase의 반응조건을 구명하고 염석 및 2회의 DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography 과정에 의해 collagenase를 분리 정제하였으며, 정제효소에 대한 활성 최적조건, 열안정성, 저해제, 금속이온의 영향, 분자량 및 반응속도 상수를 구명하였다. 천연콜라겐(Type I) 기질에 대한 collagenase의 최적 pH는 8.0이었으며 최적온도는 $60^{circ}C$였다. Collagenase는 조효소에 비해 그 비활성이 23.3배로 증가하였고, 수율은 15.5%였다. SDS-PAG 전기이동분석법으로 측정한 collagenase의 추정 분자량은 45,000 dalton이었다. 한편 이 collagenase는 $Hg^{2+}$, $Ag^+$이온에 의하여 활성이 약 80% 저해를 받았으나, $Co^{2+}$, $Ba^{2+}$, $Mg^{2+}$ 이온에 의해서는 활성이 약 30% 증가함을 알았다. 그리고 EDTA, L-cysteine, soybean trypsin inhibitor와 N-${ ho}$-toluenesulfonyl-L-lysine chloromethyl ketone(TLCK)에 의해 특이적인 저해현상을 보이므로 collagenase인 것으로 판단되었다. 이 효소의 천연콜라겐 기질에 대한 $K_m$ 정수는 $2.10{ imes}10^{-5}M$였고, 같은 기질에 대한 TLCK와 N-${ ho}$-toluenesulfonyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone(TPCK) 의 $K_i$값은 각각 $2.88{ imes}10^{-7}$과 $7.85{ imes}10^{-7}$였다.
Collagenase was isolated by direct extraction method from the muscular tissue of filefish, Novoden modestrus. The enzyme was purified 23-fold with 16% yield for the muscular collagenase by ammonium sulfate fractionation and DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography. The molecular weight of the enzyme estimated from sodium dodecyl sulphate/polyacrylamide-gel electrophoresis was 45,000 dalton. The maximum activity of the enzyme was found at pH 8.0, $60^{circ}C$ for collagen (Type I) as substrate. This enzyme was inhibited by EDTA, N-${ ho}$-Toluenesulfonyl-L-lysine chloromethyl ketone (TLCK), soybean trypsin inhibitor, L-cys-teine, $Hg^{2+}$ and $Ag^{2+}$, but activated with $Ca^{2+}$, $Co^{2+}$, $Ba^{2+}$ and $Mg^{2+}$. The $K_m$ value of the collagenase for collagen (Type I) was $2.10{ imes}10^{-5}M$. The K_i values for TLCK and N-${ ho}$-toluenesulfonyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone (TPCK) were $2.88{ imes}10^{-7}M$ and $7.85{ imes}10^{-7}M$, respectively.
