본 연구에서는 쥐간 cytosol에 있는 dolichol 결합인자의 부분정제를 행하였으며, 부분정제품의 특성을 밝혔다. 결합활성의 측정을 위하여 고속이온교환 크로마토그래피(FFLC)법을 새로이 개발하였다. 이 FFLC법은 30분 이내에 분석이 가능하며, 재현성이 양호하였다. 쥐간 cytosol의 dolichol 결합인자는 $80^{circ}C$ 5분간의 열처리와 DEAE-Toyopearl 650M column 크로마토그래피에 의해 약 60배로 정제되었다. 부분정제된 결합인자와 $[^3H]$dolichol과의 복합체는 DEAE-Toyopearl column에 흡착되는 음이온 성질을 보였으며, 단백질 분해효소인 Pronase 처리에 의해 그 결합능이 상실되는 점으로 보아 단백질의 가능성을 시사하였다. Scatchard 분석에 의해 부분정제품에는 높은 친화력 $(K_d=1.25{ imes}10^{-7}M)$과 낮은 용량(242 pmol/mg protein)의 결합부위와 낮은 친화력과 큰 용량의 결합부위가 있음을 알 수 있었다. 또한 부분정제품의 ligand 결합 특이성을 검토한 결과, 부분정제품은 dolichol과 dolichol 유도체에 대하여 친화력을 보였으며, palmitic acid, oleic acid, retinol에 대하여는 친화력을 보이지 않았다. 한편, squalene, ubiquinone, cholesterol에 대해서도 부분적으로 친화력을 보였다.
The present study describes the partial purification and characterization of dolicholbinding component(s). $[^3H]dolichol$ binding was assessed by a newly developed binding assay of fast flow liquid chromatography on DEAE-Toyopearl 650 M (1 ml). The binding component(s) for dolichol in rat liver cytosol was purified about 60-fold by heat treatment ($80^{circ}C$, 5 min) and DEAE-Toyopearl 650 M column chromatography. $[^3H]dolichol$ complex of the partially purified component(s) behaved as an anionic entity on DEAE-Toyopearl and the binding was abolished by Pronase proteolysis. Scatchard analysis revealed that the partially purified binding component(s) possessed a high affinity $(K_d=1.25{ imes}10^{-7}M)$ and low capacity (242 pmol/mg protein) binding site, and also a low affinity and high capacity site(s). By competitive binding assay, the partially purified binding component(s) showed an affinity with dolichol and its derivatives, but not with palmitic acid, oleic acid and retinol. Though not dolichol congeners, squalene, ubiquinone and cholesterol were partially competitive. No lipid binding (carrier) proteins so far described accounted for the dolichol binding activity in our preparation, and the total binding capacity estimated herein comparable to the amounts of dolichol in rat liver cytosol.
