요로계 감염에 대처함에 있어 hemolysin과 Gal-Gal pili의 multicomponent 백신 개발 가능성을 조사하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 요로계 감염환자로부터 분리되어 그의 hemolysin gene 의 염기배열과 아미노산 배열이 밝혀진 대장균 J96 균중의 hemolysin에 대하여 10곳에 해당하는 20 mer-oligonucleotide를 합성하였다. 이들 probe를 사용하여 요로계감염 환자들로부터 분리한 wild type 대장균들의 DNA에 대하여 hemolysin gene 의 상동성을 조사하였는 바 8개의 probe는 거의 모든 hemolysin signal을 보여주었고 HA484는 28.3, HA661은 71.7의 positive signal을 나타내었다.이는 요로계 감염 대장균들의 Hemolysin gene의 상동성이 매우 높은 것을 의미한다. 또한 J96 hemolysin에 대한 12개의 MAB은 모두 wild type 대장균들이 분비하는 90% 이상의 균주에 대하여 양성 immunoblotting을 나타내었다. 특히 J96 hemolysin의 functional site를 가장 강력하게 block할 수 있는 monoclonal antibody MAＢ132가 모든 wild type으로부터 분리된 hemolysin의 function을 중화시킬수 있는 결과는 J96의 cloned hemolysin product를 vaccine으로 사용할 수 있는 가능성을 증대시키는 결과라고 할 수 있다.
This work was performed to investigate the possibility of using J96 hemolysin(Hly, Hly A) vaccine against urinary tract infecting Escherichia coli. Based on the known sequence of J96 hemolysin which was originally isolated from a pyelonephritis patient, ten 20-mer oligonucleotide probes were synthesized. Radioactive labelled 8 probes showed positive colony blots against most of the hemolysin producing wild type E. coli, while HA484 and HA661 showed 28.3, 71.7% positive blots, respectively. This result means that hemolysin genes are highly conserved. Also, 12 anti-Hly MABs(monoclonal antibodies) showed more than 90% positive immunoblots against secreted hemolysin from wild type E. coli. Especially, the result that MAB132 neutralized hemolysin from all of the wild type E. coli augments the idea that hemolysin will be effective as a vaccine.
