Serratia marcescens ATCC 27117에서 부터 클로닝한 58KD 키티나아제 유전자를 subcloning 하여 2.6Kb DNA 삽입단편을 가진 플라스미드 pCHI26을 제조하고 대장균에서 발현과 분비를 살펴보았다. 키티니아제 유전자는 대장균에서 자신의 prmoter를 이용하여 매우 낮은 수준(<5mU/m$ell$)으로 발현되었으며 lac promoter를 이용하는 경우 키티니아제 발현이 증가되어 약 80mU/m$ell$가 되었다. 발현된 키티니아제는 거의 전적으로 대장균의 periplasm에 위치(약 87.8)하고 있었다. 배양시간에 따라서 세포내 키티니아제 활성을 측정해본 결과 초기정지기까지는 균체 성장과 비례해서 세포내 효소활성이 증가되었으나 정지기부터 세포내 효소활성이 급격히 줄어드는 양상을 보였다. 그러나 이 기간 동안 세포의 효소활성의 변화는 거의 없었다. 이러한 결과로 보아 periplasm에 위치한 키티나아제가 대장균의 단백분해효소에 의해서 분해되는 것으로 추정되었다.
We subcloned a 58 KD chitinase gene of Serratia marcescens into Escherichia coli and investigated the expression and secretion of the chitinase. Chitinase was produced in E. coli by using its own promoter but the levels of enzyme were very low, less than 5 mU/m$ell$. However, by the combined action of the chitinase and lac promoters, the chitinase activity increased up to about 80 mU/m$ell$. The most of the chitinase produced in E. coli was localized in periplasm and the small amounts were observed in cytosol and culture medium. Intracellular chitinase activities increased in proportion to the growth of E. coli up to the early stationary phase but rapidly decreased thereafter, which was assumed to be degradation of the chitinase by E. coli proteolytic enzymes.
