- 분변에 함유된 Cryptosporidium parvum 오오시스트의 순수분리 -Ether extraction과 discontinuous sucrose gradients의 병용
- ㆍ 저자명
- 위성환,이정길
- ㆍ 간행물명
- The Korean journal of parasitology
- ㆍ 권/호정보
- 1994년|32권 1호|pp.7-12 (6 pages)
- ㆍ 발행정보
- 대한기생충학회
- ㆍ 파일정보
- 정기간행물| PDF텍스트
- ㆍ 주제분야
- 기타
Cryptosporidium의 오오시스트를 분변에서 분리해 내는 방법은 많이 알려져 있으나 그러한 방법은 주로 설사변에 함유된 원충을 분리하는 데 적용되었다. 이 실험에서는 송아지와 마우스를 C. parvum으로 감염시키고, 그 분변으로부터 원충을 순수 분리하기 위해 ether extraction(EE)법과 discontinuous sucrose gradients(DSG)법을 병용하여 실시하였다. 먼저 EE법으로 분변 내의 지질이나 지방성분과 함께 큰 이물질을 제거한 후 돈망체를 사용하여 분변내의 이물질을 다시 한번 제거하였다. 동망체에 걸러진 분변 부유액을 2.5% potassium dichromate 현탄액으로 만들어 DSG법으로 원심한 결과 비중 1.103과 1.064의 sucrose gradient 경계부위에 횐 밴드가 관찰되었다. 흰 밴드 부위에서 이물질이 제거된 오오시스트를 회수할 수 있었는데 송아지와 마우스 분변을 트르롭으로 전처리한 부유액에 ml 당 오오시스트의 수가 많을수록 원충의 회수율은 높았다 송아지 분변에서 회수된 원충의 회수율은 EE법으로 처리된 부유액 내에 $3.8{;} imes{;}10^7/ml$개의 오오시스트가 함유되었을 때 81.6%였으며, 마우스 분변에서 회수된 원충의 회수율은 EE법으로 처리된 부유액내에 $3.2{;} imes{;}10^6/ml$개의 오오시스트가 함유되었을 때 51.6%이었다. 따라서 50% 정도의 원충을 회수하기 위해서는 EE법으로 전처리한 분변 부유액의 ml당 오오시스트의 수가 $2{;} imes{;}10^6$개 이상 되어야 할 것으로 나타났다. 또한 이 방법은 송아지의 설사분변은 물론 정상적인 분변이나 마우스 분변에 함유된, 오오시스트를 순수 분리하는데 효과적이었다.감염 후 17일 및 19일에 스파르가눔으로 성장하였고 각각 5.7% 및 7.1%의 충체가 회수되었다. 5. 올챙이에서 얻은 스파르가눔을 개와 고양이에 감염시킨 결과 15~17일에 대변에서 Spirometra의 충란이 검출되 었다. 감염 후 6주에 개에서 회수한 충체는 길이가 110cm, 폭이 0.8cm이 었다. 성숙 편절의 자궁이 4~5회 의 나선형이고 한 펀절의 길이와 폭의 비율이 1 : 2.9이었다. 횡단 절편된 펀절에서 생식공과 질구가 간격을 두 고 개구하고, 음경낭과 저정낭이 하나의 낭을 형성하여 Spirometra erinacei의 기술과 일치하였다. 이 연구의 결과로 우리 나라의 논, 저수지, 수로, 개천 등에 흔히 분포하는 담수 갑각류 중에서 M. leuckarti 와 E. serrulatus가 스파르가눔의 중간숙주가 될 수 있음을 확인하였다. 충란의 배양에서부터 종숙주의 충란 배출까지 약 2개월 정도의 기간이 소요되었고, 우리 나라 자연환경에서는 5일에서 7월에 주로 이 충체의 유충이 발육되고 전파되는 것으로 추측되었다.러 가지 방법들을 적극 적용하여 금후 검토해볼 필요가 있을 것이다.잡은 전혀 삭과가 형성되지 않았다. 이 결과는 종간 교잡종을 자방친으로 하고 그 자방친의 화분친을 사용할 때만 교잡이 이루어지고 있음을 나타내고 있다. 따라서 여교잡을 통한 종간잡종 품종육성 활용방안을 금후 적극 확대 검토해야 할 것이다하였다.함을 보이고 있다.X> , ZnCl$_{3}$$^{-}$같은 이온과 MgCl$^{+}$, MgCl$_{2}$같은 이온종을 형성하기 때문인것 같다. 한편 어떠한 용리액에서던지 NH$_{4}$$^{+}$의 경우 Dv값이 제일 작았다. 바. 본 연구의 목적중의 하나인
A calf and 50 mice were infected with Cryptosporidium parvum and their fecal materials were collected and treated 10 ether extraction (EE), followed by discontinuous sucrose gradients (DSG) method. EE method was to remove some of fat or lipid from feces. Sediments were washed by centrifugation ($1,500{;}{ imes}{;}g$ for 10 min., 3 times) In phosphate-buffered saline and then these washed sediments were sleeved sequentially through stainless steel screens with a final mesh of 250 ($61{;}{mu extrm{m}}$ porosity) to remove other debris. After sieving, the materials were suspended in 2.5% potassium dlchromate solution. Oocysts were counted by using a hemocytometer and the recovery rate of pure oocysts was calculated on the basis of the count. Following centrifugation ($1,500{;}{ imes}{;}g$ for 30 min.) by DSG method, most oocysts were recovered at the interface between a gravity of 1.103 and 1.064. The recovery rates of pure oocysts from the fecal suspension of the calf ($3.8{;}{ imes}{;}10^7/ml$) and the mouse ($3.2{;}{ imes}{;}10^6/ml$) treated with EE method were 81.6% and 51.6%, respectively. It is suggested that the recovery rate was dependent on the number of oocysts In each suspension treated with EE method. To get the 50% recovery rate, there must be more than $2{;}{ imes}{;}10^6$ oocysts per ml of the fecal suspension treated with EE method. By the combination of the two methods it was possible to isolate C. parvum oocysts from normal feces of the calf and mouse as well as from dlarrhelc feces.