Pectinestrase(PE) 중에 열에 안정한 thermostable pectineterase(TSPE)를 열에 불안정한 thermolabile pectinesterase(TLPE)로부터 구분하기 위하여 $70^{circ}C$에서 $5{sim}10$분간 가열 처리하였다. TSPE의 추출 수율을 증가시키기 위하여 추출시간, pH, 온도, NaCl의 농도 그리고 세포벽을 분해하는 가수분해 효소의 사용 등 여러가지 변화를 주어 개발한 최적 조건은 오렌지 착즙액의 pH 4.14와 같은 1 M NaCl의 acetate buffer에 분말시료의 0.2% $Cytolase^{TM}$ 104(cellulase hemicellulase와 pectinase의 혼합물) 첨가하여 가수분해하여 추출하는 것이었다. 증류수로 추출하거나 황산암모늄 $0{sim}0.3$ 포화도의 분획은 목적으로 하는 PE 이외의 단백질을 제거하는 수단으로 이용할 수 있었다. 또한 5.0% Triton TX-114의 두가지 액상을 이용한 분배의 방법은 추출한 조효소로부터 TLPE와 TSPE를 분리하는 수단으로 이용할 수 있었다.
Low yield of a thermostable pectinesterase(TSPE) from citrus fruits has made its detailed study extremely tedious and difficult; therefore, maximizing TSPE extraction is desirable. It is assumed that TSPE is bound to the cell components via ionic linkage and covalent bonds. Therefore, in this study, variations in extraction time, pH, NaCl concentration and commercial enzyme preparations were used to increase the yield of TSPE from Valencia orange. The largest recovery of TSPE, obtained by heating extracted pectinesterase(PE) at $70^{circ}C;for;5{sim}10$ minute, was achieved using actate buffer(pH 4.14) with 1 M NaCl and 0.2% $Cytolase^{TM}$ 104(a mixture of cellulase, hemicellulase and pectinase; Genecor, Inc). The two aquous phase partitioning with 5.0% Triton X-114 could be used as a tool for separation of thermolabile pectinesterase(TLPE) and TSPE from crude PE. Also, water extraction and $0{sim}0.3$ ammonium sulfate fractionation could be used for removing non-pectinesterase protein.
