본 연구는 동해방지제인 EFS35를 이용한 생쥐 미수정란의 초자화동결이 cytoskeleton과 염색체에 미치는 영향을 indirect immunocytochemistry와 염색체 분석으로 확인하고자 실시하였다. 생쥐 미수정란은 M2 배양액에 35% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.3 M sucrose와 10% FBS가 함유된 EFS35를 이용하여 초자화동결되었다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다 초자화동결된 미수정란의 융해후 생존율은 89.3%로써 노출군 (97.7%)과 차이가 없었다. 초자화동결이 미수정란의 microtubule과 microfilament에 미치는 영향을 조사하였던 바, 동결군 (95.5, 100%)의 microtubule과 microfilament의 정상적인 형성율은 대조군 (97.5, 100%) 또는 노출군 (92.3, 100%)의 결과와 비교하였을때 차이가 나타나지 않았다. 또한, 체외수정 후 동결 군에서 정상적인 염색체수를 가진 난자의 비율도 73.5%로써, 대조군 (79.5%)과 노출군 (78.7%)의 결과와 차이가 없었던 바, 생쥐 미수정란을 EFS35에 노출하고 동결하는 것이 미수정란의 cytoskeleton과 염색체 성상변화에 영향을 미치지 않는다는 것을 알 수 있었다. 따라서, 본 연구에서 사용된 동해방지제인 EFS35를 이응한 초자화동결법은 생쥐 미수정란의 동결에 적합하다는 것을 시사한다고 하겠다.
The objective of this study was to confirm whether the vitrification method using EFS35 has detrimental effect for cytoskeleton and chromosome constitution of the mouse oocytes by indirect immunocytochemistry and chromosome analysis. Mouse oocytes were vitrified using EFS35 which consisted of 35% ethylene glycol, 18% ficoll, 0.3 M sucrose and 10% FBS in M2 medium. The results obtained in this experiment were summarized as follows: When the survival rates after being exposed or vitrified in EFS35 were examined, there were not different between two groups (97.7 and 89.3%). Also, when the microtubule morphology and microfilament distribution in vitrified oocytes were examined, normal percentage of two cytoskeleton in vitrified group (95.5 and 100%) was not different from that in control (97.5 and 100%) and exposed group (92.3 and 100%). In addition, the rate of oocytes containing a normal chromosome number in vitrified group (73.5%) after IVF was not different from that in control (79.5%) and exposed group (78.7%). These results indicated that the cytoskeletal morphology and chromosome constitution of mouse oocytes were not affected by cryoprotectant (EFS35) or freezing apd that vitrification methods using EFS35 was suitable for cryopreservation of mouse oocytes.
