Hemoglobin(Hb) 가수분해도(degree of hydrolysis, DH)를 간편하고 신속하게 측정하고자 보편적으로 이용되는 TNBS법(trinitrobenzene sulfonic acid method)에 의한 가수분해도와 osmometer를 이용한 방법의 상관관계를 효소반응 조건에 따라 조사하였다. 다양한 ph 범위$(pH;7.5{sim}10.0)$에서 DH에 대한 두 방법의 상관계수($R^2$값)는 $0.974{sim}0.991$로 매우 높은 값을 보였으며, 각각 측정한 DH 사이의 비율($DH_{OSM}/DH_{TNBS}$은 $1.438{sim}1.656$의 범위에 있었다. Hb을 가수분해하여 heme-iron을 얻기 위한 특정 반응조건인 pH 7.5, $50^{circ}C$에서 Esperase와 Fla-vourzyme을 각각 사용한 경우와 Esperase와 Flavourzyme을 혼용한 경우에서도 두 방법간의 DH 비율은 효소의 종류 및 처리방법에 무관하게 1.658을 나타내어 Esperase만을 사용한 경우와 매우 유사하였고 두 방법간의 상관계수는 0.982이었다. 따라서, 두 방법간의 상관관계식으로부터 osmometer를 이용한 Hb의 가수분해도를 간편하고 신속하게 측정할 수 있었다.
An osmometrical method for determination of the degree of hydrolysis (DH) of hemoglobin was comparatively examined through TNBS (trinitrobenzene) sulfonic acid) method using two experimental variables $({alpha};and;{eta})$, which were chosen based on correlation curves between hydrolysis equivalents (h) and $leucine-NH_2$ equivalents. DH values measured through osmometry and TNBS method highly correlated with $R^2$ values of $0.974{sim}0.991$, irrespective of the reaction pHs and types of enzyme used. $DH_{osm}/DH_{TNBS}$ was >$1.438{sim}1.656$ depending on the hydrolysis pH $7.5{sim}10.0)$. Correlation euqations were well fit for measuring DH of Hb hydrolysate at different pH conditions. $DH_{osm}/DH_{TNBS}$ for co-treatment system using Esperase and Flavourzyme was 1.658, in good agreement with that of 1.656 for the single enzyme (Esperase) system. Thus, the osmometrical method was suggested to be a convenient, reliable, and rapid method for determination of DH of hemoglobin hydrolysates.
