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Mannobiose-Sepharose 담체합성 및 Affinity column chromatograpy에 의한 Debaryomyces sp. 유래 ${alpha}$-Galactosidase의 정제 및 기질 특이성
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  • Mannobiose-Sepharose 담체합성 및 Affinity column chromatograpy에 의한 Debaryomyces sp. 유래 ${alpha}$-Galactosidase의 정제 및 기질 특이성
저자명
박귀근,Park. Gwi-Gun
간행물명
한국응용생명화학회지
권/호정보
2006년|49권 3호|pp.180-185 (6 pages)
발행정보
한국응용생명화학회
파일정보
정기간행물|
PDF텍스트
주제분야
기타
이 논문은 한국과학기술정보연구원과 논문 연계를 통해 무료로 제공되는 원문입니다.
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기타언어초록

본 연구는 Debaryomyces sp.가 생산하는 ${alpha}-galactosidase$의 mannobiose-sepharose 담체합성법에 의한 affinity column chromatography를 수행하여 효소정제, 효소 화학적 성질 및 galactosyl mannooligosacchrides에 대한 기질특이성 규명을 주요 목적으로 하였다. 배양시간별 활성과 pH의 변화에서 배양시간 40시간부터 활성이 증가하고 있으며, 70시간에서 25.8unit/ml의 최대활성을 나타내고 있으며, 배양초기 pH 6.0에서 시작되어 배양말기에는 pH 8을 나타내는 pH의 변화를 보였다. 최적 pH는 4.0, 최적온도는 $60^{circ}C$이며 $pH;3{sim}4.5$에서 100%의 잔존활성을 나타낸 반면 pH 8.0에서는 20%로 급격히 감소하였고. 온도안정성에서 $30{sim}50^{circ}C$에서는 100%의 잔존활성을 나타내었으나 $70^{circ}C$ 이상에서는 20% 이하의 잔존활성을 나타내었다. $Hg^{2+}$에 의해서 54%, $Ag^{2+}$에 의해서는 85%로 저해되었으며, 그 이외의 이온에 대해서는 큰 영향을 받지 않았다. Debaryomyces sp.유래 ${alpha}-galactosidase$는 24시간 반응 후 melibiose, $Gal^3Man_3$를 완전 가수분해 하여 각각 galactose와 glucose, galactose와 mannotriose로 분해되었으나 $Gal^3Man_4$에 대해서는 12시간 반응시켜도 기질로부터 galactose 유리가 불가능함이 확인되었다.

기타언어초록

${alpha}$-Galactosidase was partially purified from the culture filtrate of Debaryomyces sp. by Mannobiose-Sepharose affinity column chromatography. The galactosidase exhibited maximum activity at pH 4.0 and $60^{circ}C$, and was stable in the pH and temperature ranges of 3 to 4.5 and 30 to $50^{circ}C$, respectively. The enzyme was inhibited by $Hg^{2+};and;Ag^{2+}$. The enzyme activity was not affected considerably by treatment with other metal compounds. The enzyme hydrolyzed melibiose to galactose and glucose, raffinose to galactose and sucrose, and $Gal^3Man_3$ ($6^3-{alpha}$-galactosyl-1,4-mannotriose) to galactose and mannotriose. On the contrary, it could not hydrolyze $Gal^3Man_4$ ($6^3-{alpha}$-galactosyl-1,4-mannotetraose).