짚에서 60균주를 분리하여 생균제제로서의 기능이 있는 청국장 제조용 starter로 사용가능성을 조사하였다. 분리한 60균주 중 단백 분해력, 전분 분해력, 대두 분해력을 나타낸 균주는 B-59 등 8균주 이었으며 모두 그람 양성 간균으로 포자를 형성하였다. 선별된 8균주의 Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Shigella sonni, Pseudomonas fluorescens, Vibrio parahaemolyticus에 대해 항균활성을 나타낸 균주는 B-59이었다. 항균활성을 나타낸 분리균주 B-59에 의해 L. monocytogenes, S. aureus, V. parahaemolyticus, P. fluorescens의 성장은 억제되었으며. API 50CHB kit를 이용하여 동정한 결과 99.0%의 유사율로 Bacillus licheniformis로 간이 동정되었다. 분리균주인 B-59는 pH 2.5로 조정된 인공 위액에 초기 생균수 8.33 CFU/mL에서 $37^{circ}C$에서 3시간 배양 후의 6.91 CFU/mL로 높은 생존율을 나타내었으며, 인공담즙산에서 초기 균수 6.90 CFU/mL에서, 배양 24시간 후 8.24 CFU/mL로 증가하여 내성을 나타내었다. 분리균주인 B-59는 NaCl 0, 2, 4% 농도에서는 각각 7.63, 7.70, 7.67 CFU/mL로 성장에 영향을 미치지 않았으나, 32% 농도에서도 생존하여 NaCl에 대한 내성을 나타내었으며, 알코올농도 32%에서도 4.22 CFU/mL를 나타내어 에탄올에 대한 내성을 나타내었다. DPPH radical 소거능으로 측정한 B-59 배양액의 항산화 활성이 균주의 성장에 따라 증가하였다.
The primary objective of this study was to select a probiotic starter for cheonggukjang using 60 strains isolated from rice straw. Among isolated strains, only 8 strains including strain B-59 evidenced proteolytic, amylolytic and soybean activity. These 8 strains were all gram-positive, spore-forming rods. The B-59 strain evidenced antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas fluorescens, and Vibrio parahaemolyticus. The antimicrobial activity of isolated B-59 was verified by its ability to inhibit the growth of S. aureus, L. monocytogenes, P. fluorescens, and V. parahaemolyticus. The selected B-59 strain was indentified as Bacillus licheniformis, as shown by a result of 99.0% homology upon API kit analysis. The selected B-59 strain also displayed viability in pH 2.5 artificial gastric juice, artificial bile acid, NaCl (2, 4, 8, 16, 32%), and ethanol (4, 8, 16, 32%). The antioxidative activity of the strain B-59 culture was assessed via a DPPH free radical scavenging activity assay. The activity increased with an increasing in the fermentation time of strain B-59 for 20 hours.
