식물성장촉진물질인 auxin을 비롯한 식물병원성진균을 방제하는 siderophore 그리고 식물병원성 진균의 세포벽을 분해하는 cellulase를 동시에 생산하는 생물방제균주 B. subtilis AH18의 토양내 monitoring을 위하여 각 생산물질에 관여하는 유전자를 기초로 primer(sid, aec, cel)를 제작하였다. Single PCR 및 multiplex PCR을 수행하여 800-bp(sid), 1000-bp(air), 1600-bp(cel)의 DNA fragment를 확인하였으며, 각각의 fragment는 siderophore의 생합성 key enzyme인 2,3-dihydro-2,3-dihydroxy benzoate dehydrogenase[EC : 1. 3. 1, 28]gene (sid-794bp)이며, auxin efflux carrier gene (aec - 1052 bp), 그리고 cellulase gene(cel - 1582 bp)임을 확인하고, NCBI Genbank에 등록하였다(Genbank accession sid: No. EF408238, aec: No. EF408239, cel: No. EF070194). 또한 B. subtilis AH18을 처리한 일반 경작지 토양에서 multiplex PCR을 통하여 3종의 유전자에서 증폭된 triple band를 확인하였으며, 고추를 실제 토양을 이용해 Pot에 이식 후 고추의 rhizosphere와 non-rhizosphere에서 B. subtilis AH18의 존재를 확인할 수 있다. 뿐만아니라 본 균주를 고추가 이식된 Pot의 토양에 처리 후 monitoring시 민감도는 $1.8 imes10^5$ cfu/g이었고, monitoring 가능한 기간은 3주이상 확인 할 수 있었다.
The genetic monitoring method was developed for the rapid detection of the PGPR and biocontrol agent, B. subtilis AH18 in red-pepper field soil by multiplex PCR using sid, aec and cel gene primers. The monitoring of B. subtilis AH18 in the soil was carried by amplified a 2,3-dihydro-2,3-dihydroxy benzoate dehydrogenase [EC: 1. 3. 1. 28]gene (sid - 794 bp : EF408238) which is a key enzyme of siderophore synthesis, an auxin efflux carrier gene (aec - 1,052 bp : EF408239) and a cellulase gene (cel - 1,582 bp : EF070194). The natural un sterilized soil was inoculated with B. subtilis AH18 to determine the sensitivity ($1.8 imes10^5$ cfu/g) of multiplex PCR for the rapid dectection and then the strain was monitored successfully in rhizosphere or non-rhizosphere soil of red-pepper cultural soil. At 3 weeks after the treatment, density of the strain was monitored more abundantly in rhizosphere soil.
