본 연구에서는 국산 포도로부터 분리된 효모들 중 와인 발효 적성이 우수한 균주들을 선정하여 ITS-I-5.8S-ITS II DNA 염기서열 분석과 분자생물학적인 방법을 통하여 동정하였고 발효환경 내성을 알아보았다. 분리 효모들의 ITS I-5.8S-ITS II 영역을 PCR로 증폭한 결과 약 800bp의 DNA가 증폭됨을 확인하였다. 이 DNA를 제한효소 HaeIII로 처리한 경우 모두 약 400bp의 DNA band 확인되었고, Hinf I로 처리한 경우에는 약 350 bp와 300 bp의 DNA band를 나타내었다. 분리된 4 균주의 염색체 DNA를 PFGE로 확인한 결과 MM10, WW108 그리고 SS89(SS812 동일)가 서로 다른 3가지 염색체 패턴을 나타내었다. ITS I-5.8S-ITS II DNA 염기서열을 분석한 결과 모두 S. cerevisiae CBS 4054 표준균주와 97% 이상의 상동성을 나타내어 매우 가까운 근연관계에 있음을 알 수 있었다. 근린결합분석을 이용한 phylogenetic 분석을 통하여 분리 균주인 MM10, SS89, SS812 그리고 WW108 균주는 S. cerevisiae CBS 4054 표준 균주와 계통 유연관계에서 매우 가까운 위치에 있는 것을 확인할 수 있었다. 동정된 4종의 야생효모 중 200 ppm의 아황산 함유 배지에서 MM10과 WW108 균주는 24시간대에서 6% 미만의 생육 저해률을 보였다. 또한 $30^{circ}C$ 배양온도에서 30% 포도당을 함유하는 YPD 배지에서 36시간대에서 가장 높은 성장을 나타내었으며, 특히 SS89 균주는 660 nm에서의 흡광도가 약 40에 가까운 수치를 나타내었다. 배양온도 $40^{circ}C$에서는 모든 효모군이 10~15의 수치를 나타내어 낮은 성장을 나타내었다. 알코올(8%, v/v)을 함유하는 YPD 배지에서 배양초기에는 내성이 약하였으나 배양이 진행되면서 적응을 하기 시작하고 24시간대에서 가장 낮은 생육 저해률을 보였다.
Several wild yeasts were isolated from Korean grape varieties before and during spontaneous fermentation. Among them, four strains were isolated based on the alcohol content and flavor production in wine after fermentation of apple juice. In this study, the four yeast strains were identified and characterized. PCR-restriction fragment length polymorphism analysis of ITS I-5.8S-ITS II region with restriction endonuclease Hae III and Hinf I resulted in that all the strains showed a typical pattern of Saccharomyces cerevisiae. Pulse field gel electrophoresis showed three different chromosome patterns with a same band between strains SS89 and SS812. When ITS I-5.8S-ITS II sequences of the four strains were compared with one another, they were similar to those of Saccharomyces cerevisiae CBS 4054 type strain. Identity of the sequences was higher than 97% with those of the type strain. Phylogenetic analysis showed based on the sequences showed they were genetically closed to the type strain. The four identified strains were tested in a medium containing 200 ppm potassium metabisulfite, and the MM10 and WW108 inhibition rates resulted at up to 24 h. The four strains were tested at an incubation temperature of $30^{circ}C$. The 30% sugar concentration in the medium (w/v) showed the highest growth in 36 h, especially in the case of SS89, which was close to growth 40. The four strains were tested in an 8% ethanol medium (v/v). Alcohol tolerance was initially kept in the incubation process. The strains began to adapt, however, to the exceeded resistance. The four strains showed the lowest inhibition rate at 24 h.
