난백에 있는 40여 가지의 단백질의 기능적 특성에 대한 연구가 폭 넓게 진행되고 있지만, 그 특성이 모두 확인되지 않았다. 난백에서 순수하면서 변성되지 않은 단백질을 분리하는 방법을 연구하기 위해 본 연구에서는 난백 중 함량이 많은 lysozyme, ovotransferrin, ovalbumin을 분리했다. 난백에서 단백질을 다른 분리 방법보다 선택적으로 분리가 가능한 이온 교환 크로마토그래피를 이용했다. 그리고 분리된 단백질을 동정하기 위해서 Reversed-phase HPLC (RP-HPLC)를 사용했다. 이온 교환 크로마토그래피에서 HI Trap ion exchange cartridge (GE Healthcare, USA)를 사용했고, 그 중에서 양이온 교환 수지 SP (완충용액 pH 8.0, pH 5.2)와 음이온 교환 수지 Q (완충용액 pH 8.0)로 난백 단백질을 분리하였다. 분리한 난백 단백질들의 동정용 RP-HPLC에서는 C18 컬럼(Phenomenex, USA)을 사용했고 등용매 용리에서 이동상으로 acetonitrile (ACN)/distilled water (DW)/trifluoroacetic acid (TFA)의 부피비를 50/50/0.1로 사용했다. 이온 교환 크로마토그래피에 의해 각 단계에서 분리된 용출용액을 RP-HPLC으로 분석한 크로마토그램과 표준시료의 크로마토그램의 체류시간을 비교하여 난백에 포함된 ovotransferrin, ovalbumin, lysozyme이 순차적으로 용출됨을 알았다.
Approximately forty proteins in egg white have been widely studied for their functional properties. To develop a procedure of separation for pure and non-altered proteins from egg white, purification study was conducted to isolate lysozyme, ovotransferrin, and ovalbumin. Ion exchange cartridge can selectively separate proteins from egg white, and reversed-phase HPLC (RP-HPLC) could identify separated proteins. Proteins in egg white were purified by HI trap ion exchange cartridge SP and Q with buffers pH 8.0 and 5.2. C18 column (Phenomenex, USA) was used for RP-HPLC analysis and isocratic mobile phase was used with acetonitrile (ACN)/distilled water (DW)/trifluoroacetic acid (TFA) in the ratio of 50/50/0.1. Comparing the retention times of standards in RP-HPLC experiments showed that ovotransferrin, ovalbumin, and lysozyme in egg white were eluted successively in the RP-HPLC column after the pretreatment in SP and Q ion exchange cartridges.
