소나무 꽃가루를 파쇄하여 Hogeboom (1968)의 방법으로 세포의 각 분획을 분리하였다. 그리고 trehalase의 활성도를 측정하고 세포질 분획의 trehalase 를 ammonium sulfate에 의한 침전, DEAE-cellulose 및 Sephadex G-200 column chromatography를 행하여 정제하였으며 그 성상을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 소나무 꽃가루에 있는 trehalase 는 cytosol에 약 80% 그리고 mitochondria에 약 4%, nuclei 에 약 10% 함유되어 있었다. 2. 소나무 꽃가루의 세포질 분획에서 이 효소를 81배 정제하였으며, 기질로는 trehalose에 대해서만 활성을 나타냈다. 3. 이 효소활성의 최적 pH 는 5.4였으며, 최적온도는 $60^{circ}C$였다. 4. 이 효소의 기질에 대한 Km값은 $2.56{ imes}10^{-3}M$이었다. 5. 반응 생성물이 glucose임을 paper chromatography에 의해 확인하였다. 6. 양이온이 이 효소에 미치는 영향은 $Na^+$이 $1{ imes}10^{-4}{sim}1{ imes}10^{-3}M$농도에서 효소활성도를 약 14~17% 증가시켰으나, 농도의 증가에 따라 억제 현상이 증가되었다. 또 $Mg^{++}$ 경우에도 $1{ imes}10^{-5}M{sim}1{ imes}10^{-4}M$ 농도에서 활성도가 27~15% 증가되었으나 농도의 증가에 따라 현저한 억제현상을 보였다. 7. $K^+$, $Ca^{++}$의 경우에는 같은 농도 범위에서 효소활성에 변화가 없었다. 8. 이 효소의 분자량은 약 70,000이었다.
Trehalose, the alpha-1,1 linked disaccharide of glucose, occurs widely in nature. This sugar has been isolated from bacteria, yeast, fungi and a number of invertebrates, where it functions as reserve carbohydrate. Trehalase(${alpha},{alpha}$-trehalose 1-D-glucohydrolase, EC 3.2.1.28.) responsible for the hydrolysis of trehalose was isolated from pine pollen(Pinus densiflora Siebold) and purified 81 times by DEAE-cellulose column and Sephadex G-200 column chromatography. The activity of trehalase was measured by method of Lapp and Mason. The enzyme activity in pine pollen was detected 80.46% in cytosolic fraction, 4.09% in mitochondria) fraction and 10.33% in nucleic fraction. The pH optimum for enzymatic activity was found to be 5.4 and optimal temperature was $60^{circ}C$ and the Km value for trehalose was estimated to be about $2. 56{ imes}10^{-3}M$. The product of reaction was identited as D-glucose by paper chromatographic method. The trehalase activity was activated as much as 14∼17% by $1{ imes}10^{-4}M{sim}1{ imes}10^{-3}M$ concentration of $Na^+$, and 27~15% by $1{ imes}10^{-5}M{sim}1{ imes}10^{-4}M$ of $Mg^{++}$, and the other cations($K^+$, $Ca^{++}$) were tested for their abillity to replace $Mg^{++}$, but none was effective. The molecular weight of trehalase was estimated to be approximately 70,000 by Sephadex G-200 gel filtration.
