하나의 A형태와 두개의 B형태의 ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase가 사람의 정액으로부터 분리되었다. 사람의 seminal plasma를 희석시킨 다음 $(NH_4)_2SO_4$로 분획 분리시켰다. DEAE-cellulose column으로부터 ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B는 완충 용액만으로 용출되어졌으며 $A_1$과 $A_2$는 각각 0.1M NaCl과 0.25M NaCl에서 용출되어졌다. 각 효소는 P11 cellulose phosphate와 Sephadex G-200 크로마토그래피법에 의하여 더욱 정제되어졌다. 고순도로 정제된 ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B는 pH 8.3의 disc gel electrophoresis에서 하나의 단백질 띠로 나타나는 반면, $A_1$과 $B_2$는 하나의 주된 띠와 다른 하나의 가는 띠로 나타났다. 이 세효소는 모두 pH 4.5에 서 가장 높은 활성도를 나타내고 있으며 온도에 대한 가장 높은 활성도는 B 형태가 $50-54^{circ}C$에서 나타났고 $A_1$과 $A_2$ $43^{circ}-47^{circ}C$에서 나타났다. 세 효소는 기질로서 p-nitrophenyl-${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminide를 사용하였을 때 모두 Km값이 1.33 mM로 동일하였다. Sulfite와 acetate 및 N-acetyl-D-glucosamine은 세 효소의 활동도를 모두 방해하였으며 특히 N-acetyl-D-glucosarnine은 ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase들을 경쟁적으로 방해하였으며 Dixon의 그래프법에 의하여 KI값을 구한 결과 B형태는 1.64 mM이었고 A형태는 1.96 mM이었다. 베타-엔-아세틸-디-글루코 사미니다아제의 분자량은 젤 여과법에 의하여 구한 결과 170,000이었다. DEAEcellulose column용출액 중에서의 ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B는 $60^{circ}C$에서 4시간 반응한 후에도 70%의 활성도를 유지하였으나 $A_1$과 $A_2$형태의 효소는 대단히 불안정하였다. 그러나 고순도로 정제된 세 효소는 모두 $60^{circ}C$에서 30분이내에 완전히 활성도를 잃었다.
Three ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase (E.C. 3.2.1.30) of one B form and two A forms were isolated from human semen. The enzyme from human seminal plasma was fractionated by $(NH_4)_2SO_4$. By DEAE-cellulose chromatography, ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B was eluted with buffer alone and $A_1$ form and $A_2$ form of ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase were eluted with 0.1 M NaCl and 0.25 M NaCl respectively. Each enzyme was further purified by P11 cellulose phosphate and Sephadex G-200 chromatography. The highly purified ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B showed one major protein band and $A_1$ form and $A_2$ form showed one major and one minor bands on disc gel electrophoresis at pH 8.3. Three of the enzyme had maximum activities at pH 4.5, but the temperature optimum was $50-54^{circ}C$ for B, $43-47^{circ}C$ for $A_1$ and $A_2$. The three enzymes had identical Km values of 1.33mM with p-nitrophenyl-${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminide as substrate. Sulfite, acetate and ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase the ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B, $A_1$ and $A_2$ activities. N-acetyl-n-glucosmine inhibited ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase competitively and the $K_I$ values were 1.64 mM for ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B and 1.96 mM for ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase A by Dixon plot. The molecular weight of human semen ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase was 170,000 by gel filtration. The DEAE-cellulose fractions which showed ${eta}$-N-acetyl-D-glucosaminidase B activity retained 70% of its activity at $60^{circ}C$ for 4 hrs, whereas $A_1$ and $A_2$ were heatlabile. However incubation at $60^{circ}C$ for 30 min completely inactivated the three purified enzymes.
