사람의 피로부터 hepatitis B virus(HBV)를 순수 분리한 뒤 endogenous DNA polymerase 반응에 의해 완전한 double strand HBV DNA를 얻었다. 이 circular double stranded DNA를 BamHI으로 절단한 둬 pBR322에 삽입시켜 HBV의 total genome을 포함하는 재조합 plasmid pHBV-315를 제조하였다. cloning된 viral genome을 분석하기 위해 pHBV-315의 제한효소 지도를 작성하고 일부 염기 서열을 비교 조사하였다. 이 결과로부터 subtype adr HBsAg 유전자가 포함된 HBV DNA가 cloning 되었음을 알 수 있었다. pHBV-315로 부터 pHBV-15를 재조합하여 LMTK-세포와 E. coli에서 HBsAg 유전자의 발현을 조사하였다. 그 결과 LMTK-세포에서는 HBsAg이 검출되었고 E. coli에서는 검출되지 않았다.
Dane particles were purified from human plasma and the DNA containing the single strand region was filled-in by endogenous DNA polymerase. Recombinant plasmid pHBV-315 was constructed by inserting the total HBV DNA into pBR322 DNA. Restriction enzyme map and nucleotide sequence of pHBV-315 suggested that the HBsAg subtype of the cloned HBV DNA is adr and how HBsAg gene is arranged in pHBV -315. pHBV -15 was constructed to direct the expression of HBsAg gene. When LMTK-cells and E.coli were transformed by pHBV-15, HBsAg was produced in LMTK-cells but not in E.coli.
