시금치잎으로 부터 분리한 glycolate oxidase는 arginine과 선택적으로 반응하는 시약, phenylgnyoxal이나 2,3-butanedione에 의해 비활성화 되었다. Phenylglyoxal에 의한 결손효소(apoenzyme)나 전효소(holoenzyme)의 비활성화 반응은 유사일차반응이고, 변형제 농도에 대해서는 일차이다. 기질의 경쟁적 저해제 oxalic acid나 oxalacetic acid는 전효소의 비활성화에 대해서는 효과적으로 방어하지만 결손효소의 비활성화에 대해서는 효과를 나타내지 않았다. 저해제에 의한 방어의 정도는 저해제의 농도와 상관관계가 있었다. 조효소에 FMN의 결합에 의해 효소의 비활성화 속도는 3배 정도 증가하였으며, 이러한 결과는 결손효소가 전효소로 변형될때 기질의 결합에 필요한 arginine이 노출되기 때문인 것으로 추측된다. Glycolate oxidase는 butanedione에 의해 비활성화 되었으며, borate는 비활성화 속도를 촉진시키는 효과를 보여 주었다. Butanedione에 의한 비활성화 반응은 과량의 butanedione과 borate를 제거함으로 효소의 활성이 재생되는 가역적 반응이였다. 이러한 실험결과로부터, arginine은 기질의 결합에 필수적이며, 기질의 음이온 카르복실기의 결합 부위로서 역할을 하는 것으로 생각된다.
Glycolate oxidase from spinach is inactivated by arginine-specific reagents, phenylglyoxal and 2,3-butanedione. Inactivation of both apo- and holoenzyme by phenylglyoxal follows pseudo-first-order kinetics and first order with respect to modifier. The substrate-competitive-inhibitors oxalic acid and oxalacetic acid provide protection against inactivation of the holoenzyme but have no significant effect on the inactivation of apoenzyme. The extent of protection is related to the concentration of inhibitor. Binding of coenzyme flavin mononucleotide increase the rate of inactivation 3-fold by probably exposing an arginyl residue essential for substrate binding. The oxidase is also inactivated by 2,3-butanedione, and the rate of inactivation is related to the concentration of borate in solution. Inactivation of the oxidase by butanedione is reversible on removal of excess butanedione and borate. These data provide evidence of essential role of an arginyl residue in the binding of substrate. as a binding site for negatively charged carboxylate group of the substrate.
