XhoII endonuclease를 Xanthomonas holcicola로부터 분리 하였으며 여러 group specific reagents를 사용하여 효소의 비활성화, 기질에 의한 비활성화 억제와 비활성화된 효소의 재활성화 등을 조사하여 효소 활성에 관여하는 amino acid residue를 조사하였다. XhoII endonuclease의 분자량은 gel filteration을 통해 76,000으로 나타났고 이 효소의 최적온도는 $37^{circ}C$이고 pH7.5에서 8.0사이에는 활성도에 변화을 주지 않는 최적 pH임이 밝혀졌다. XhoII endonuclease에 group specific reagents인 phenylglyoxal(arginine), PLP와 O-phthalaldehyde(lysine), DTNB와 NEM(cysteine) 그리고 DFP (serine)을 적용시킨 결과 효소활성이 억제되었다. DTNB와 NEM, phenylglyoxal 그리고 DFP에 의한 효소활성 억제에 대한 기질인 pUC9 DNA가 보호 효과를 보였으며 특히 DTNB와 NEM에 의한 효소의 비활성화는 ${eta}$-MSH에 의해 활성이 회 복되었다. 이런 결과로 XhoII endonuclease활성에 arginne, serine 그리고 cysteine residue가 관여할 것이라 생각되며 특히 cysteine residue가 중요한 역할을 하고 있을 것이라 사료된다.
XhoII endonuclease was purified from Xanthomonas holcicola by streptomycin sulfate fractionation, phosphocellulose, heparin agarose, Sephadex G-100, DNA-cellulose and DEAE-sephacel column chromatography. The molecular weight of XhoII endonuclease was 76,000 measured by Sephadex G-100 and G-200 column chromatography. 22,000 units of XhoII endonuclease was obtained from 100 g of cell paste. XhoII endonuclease has an optimum temperature of $37^{circ}C$ with pH 7.5 to 8.0. XhoII endonuclease activity was remarkably inhibited above a NaCl concentration of 150 mM. XhoII endonuclease activity was also severely inhibited above 0.5 mM NEM and 1 mM DTNB, the thiol group modification reagents, and 3 mM phenylglyoxal, the arginine modification reagent. But XhoII endonuclease from inactivation by these reagents was protected by substrate DNA. So there is a possibility that the thiol group and arginine residue play an important role in the XhoII endonuclease activity.
