LPS와 PMA를 다양하게 조합하여 사람 단핵구 세포를 처리해서 이들로부터 사람 종양괴사인자가 생성되었다. 특히 사람 단핵구 세포 ($2{ imes}10^7$ 세포/ml)를 PMA (10 ng/ml)로 먼저 6시간 처리하고 LPS $(20{mu}g/ml)$로 나중에 6시간 처리하였을 때 가장 높은 종양괴사인자 활성을 얻을 수 있었다. 유도한 종양괴사인자는 혈청이 포함되지 않은 배양배지로부터 DEAE-Sephacel 이온교환 크로마토그라피, Sephadex G-75 gel filtration, SDS-PAGE 용출방법에 의해 정제하였다. SDS-PAGE 방법에 의해 결정된 종양괴사인자의 분자량은 대략 17,800 정도였고 Sephadex G-150 gel filtration 방법에 의해 얻은 native 분자량은 68,000 정도였다. 반면에 ${lambda}gt11$ 발현 운반체 system에 의해 E. coli에서 발현된 recombinant 사람 종양괴사인자의 분자량은 Western blot 분석과 Sephadex G-150 gel filtration 방법에 의해 모두 17,400 정도로 나타났다. 이 같은 결과들로 보아 종양괴사인자의 monomer 형태와 multimer 형태가 모두 생물학적으로 활성을 갖는다는 것을 알 수 있다.
Human tumor necrosis factor(TNF) was produced from human peripheral monocytes by treatment of the cells with various combinations of lipopolysaccharide(LPS) and phorbol myristate acetate(PMA). The best induction of TNF activity could be achieved when human peripheral monocytes ($2{ imes}10^7$ cells/ml) were first treated with 10 ng/ml of PMA for 6 hours followed by 6 hours treatment with LPS$(20{mu}g/ml)$. Induced TNF from serum-free culture media was purified by DEAE-Sephacel ion exchange chromatography, Sephadex G-75 gel filtration and SDS-PAGE elution. The molecular weight of the TNF as determined by SDS-PAGE was about 17,800, while the native molecular weight obtained by Sephadex G-150 gel filtration was 68,000. On the other hand, the molecular weight of recombiant human TNF obtained in E. coli by ${lambda}gt11$ expression vector system was estimated to be 17,400 by Western blot analysis and Sephadex G-150 gel filtration. These results suggest that both monomeric and multimeric forms of TNF are biologically active.
