Subtilisin Carlsberg의 tyrosine기의 요오드화 반응에 관하여 연구하였다. 요오드화 되는 정도를 알아보기 위해 lactoperoxidase 촉매 방식으로 여러 $K^{125}I$ 농도조건에서 subtilisin을 반응시켰다. 요오도화 되는 tyrosine의 수는 0.3mM까지 KI 농도에 비례했으며, 0.7mM 이상에서는 포화되는 양상을 보였다. 13개의 tyrosine 중 7-8개가 요오드화 되었다. 0.05mM KI에서 1개의 tyrosine이 요오드화 되었으며, 이 조건에서 반응시킨 요오드화 된 subtilisin을 분광학적 방법과 peptide mapping으로 연구하였다. 등전초점화와 non-dissociating PAGE에서, 요오드화 되는 tyrosine의 수가 많아짐에 따라 단백질은 양극을 향해 많이 이동했다. 요오드화 됨에 따라 subtilisin의 중성 pH와 알칼리 pH의 differencial spectrum이 4nm 가량 장파장쪽으로 이동하며, phenolic hydroxyl group의 이온화 상수는 10.13에서 9.90으로 감소함이 관찰되었다. 300nm에서 나타나는 subtilisin의 형광은 요오도화 됨에 따라 줄어들었다. Tyrosine 중 가장 반응성이 높은 것을 알아보기 위해 요오드화된 subtilisin을 trypsin으로 처리하여 얻어진 peptide 중 가장 방사능을 많이 갖는 것을 HPLC에 의해 분리했다. 이것의 아미노산 성분 분석으로부터 Tyr 104가 가장 반응성이 높은 residue로 제안되었다.
Iodination of tyrosine residue in subtilisin Carlsberg was studied. Iodination was carried out by lactoperoxidase with various concentrations of $K^{125}I$ to examine the degree of iodine incorporation. Incorporation of iodine was linear up to 0.3 mM KI and saturation occurred above 0.7mM KI. 7-8 out of 13 tyrosine residues were iodinated. The concentration of KI at which one iodine atom was incorporated was 0.05 mM. At this condition, spectroscopic studies and peptide mapping of iodinated subtilisin were performed. As the degree of iodine incorporation increased, iodinated subtilisin migrated more rapidly in isoelectricfocusing and non-dissociating PAGE. The pH differential spectra of iodinated subtilisin was red-shifted up to 4 nm compared with native one. The pKa of phenolic hydroxyl group of iodinated protein altered from 10.13 to 9.90. Fluorescence of subtilisin at 300 nm decreased when the protein was iodinated. To identify the most reactive tyrosine, iodinated subtilisin was digested with trypsin and resulting peptide of the highest $^{125}I$ radioactivity was separated by HPLC. From the analysis of amino acid composition, it was suggested that Tyr104 was the likely residue that can be iodinated most easily.
