Escherichia coli의 주화성 단백질인 CheY를 Affi-gel blue affinity chromatography와 Sephacryl S-200 gel filtration chromatography를 통하여 순수 분리하였다. 순수 분리된 CheY단백질은 효모로부터 분리한 acetyl-CoA synthetase(ACS)에 의해 in vitro에서 아세틸화 반응이 일어나는 것을 방사선 동위원소 표식법으로 확인하였다. 이 때 acetyl-CoA를 넣어주면 아세틸화가 줄어드는 것으로 보아 아세틸 공여체로 acetyl-CoA가 아닌 다른 물질이 이용되는 것으로 추측된다. Histone 단백질의 modification을 분석하기 위한 acid-urea gel을 변형하여 CheY의 분석에 적합한 urea gel을 고안하였다. Urea gel은 native gel에 비해 분해능이 더 좋고 CheY가 다른 단백질들과 뚜렷하게 분리되는 장점이 있었다. Urea gel을 사용하여 CheY의 아세틸화뿐만 아니라 CheA에 의한 인산화도 관찰하였으며, gel상에서 이들을 수식되지 않은 형태의 CheY로부터 분리할 수 있었다. CheY 단백질 종을 분리하여 분석한 결과 적어도 두 군데 이상의 아미노산 잔기에 수식이 일어날 가능성이 제시되었다.
The CheY, a signaling protein involved in bacterial chemotaxis, was purified by Affi-gel blue affinity chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration chromatography. Purified CheY was acetylated in vitro by acetyl-CoA synthetase (ACS; isolated from yeast) using $[2-^{14}C]-acetate$. Coenzyme A reduced the level of acetylated CheY, suggesting that other metabolic intermediates of acetate but not acetyl-CoA serves as an acetyl donor. To investigate the modification of CheY protein by acetylation, we developed a urea gel electrophoresis system similar to acid-urea gel electrophoresis that has been used for the analysis of histone modification. The resolution of urea gel was found better than that of native gel, in which CheY protein was clearly separated from other cellular proteins. In addition to CheY acetylation, CheY phosphorylation by CheA was detected on urea gel as multiply modified forms separated from the unmodified one. Analysis of the modified CheY bands revealed that CheY has more than one site for acetylation and for phosphorylation.
