해조류 추출물을 대상으로 항보체 활성을 검색한 결과 우수한 활성을 나타낸 참도박을 열수 추출하여 활성물질을 정제하였다. 참도박 열수 추출물을 ethanol 침전을 통해 조다당류를 얻었다. 조다당류 PE-1을 한외여과를 실시하여 분자량에 따라서 100 kDa 이하의 PE-1-A, 100에서 300 kDa 이하의 PE-1-B, 300 kDa이상의 PE-1-C를 얻었으며 우수한 활성을 보인 PE-1-C(ITCH50(%): 71.5%)를 DEAE-Toyopearl 650C ion exchange column에서 분리하여 0.75M NaCl(PE-1-CIV) 용출 획분을 이용하여 size exclusion chromatography를 실시하였다. Sepharose CL-6B 통해서 분리된 PE-1-CIV-ii ($ITCH_{50}(%)$, 82.9%)는 분자크기가 780 kDa이었으며 HPLC상에서 동질성을 가진 다당류로 확인되었다. 또한 정제 다당류 PE-1-CIV-ii는 고전 경로뿐만 아니라 보체 부경로 또한 활성화시켰으며 구성단당류는 galactose(44.3%), 3,6-anhydrogalactose(34.0%), glucose(8.2%), fucose(5.4%), xylose(5.2%) 및 rhamnose(2.9%)이고 sulfate기가 30.5%인 함황 다당류로 확인되었다. periodate 산화물과 효소 소화물에 대한 활성측정에서 PE-1-C의 pronase 소화물은 활성 감소가 없었으나 periodate 산화물에서는 활성이 감소되는 다당류의 특징을 나타내었다. PE-1-A, B, C의 sarcoma-180 고형암 모델에서 항암효과는 항보체 활성과 유사한 경향을 나타내었고 분자량이 가장 큰 PE-1-C가 대조군에 비해서 81%의 증식저해를 나타내어 항보체 활성과 항암효과가 상관성을 가짐을 시사하였다.
In the preliminary study, we investigated the anti-complementary activities of 62 extracts from Korean edible seaweeds. Of those, Pachymeniopsis elliptica showed the highest anti-complementary activity. Therefore, it was purified as follows; i) PE-1 by ethanol precipitation, ii) PE-1-C by ultrafiltration, iii) PE-1-CIV by DEAE-Toyopearl 650C, and iv) PE-1-CIV-ii by Sepharose CL-6B. The purified compound, PE-1-CIV-ii, was the complexed homogeneous polysaccharide (molecular mass: 780 kDa) with 82.9% of anti-complementary activity. Also, it contained a significant amount of sulfate group (30.5%), which indicated it as a sulfated algal polysaccharide. Its structural monosaccharides were galactose (44.3%), 3,6-anhydrogalactose (34.0%), glucose (8.2%), fucose (5.4%), xylose (5.2%) and rhamnose (2.9%). After the treatment of periodate on a sample, a significant decrease in anti-complementary activity was found, which was a characteristic of bioactive polysaccharides. And-tumor activity of PE-1-A, B and C was tested in the sarcoma-180 solid tumor model. The PE-1-C with the largest molecular mass (more than 300 kDa) showed 81% of inhibition on the solid tumors, suggesting that the anti-complementary activity was, at least in part, related to anti-tumor activity. Based upon these results, the purified polysacchardes could be an immunopotentiator in vivo.
